2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景:
  IgA腎?。↖gA nephropathy,IgAN)是我國乃至全球最常見的原發(fā)性腎小球腎炎,其特征是免疫熒光下見到以IgA為主的免疫復(fù)合物在腎小球系膜區(qū)和/或腎小球毛細血管襻沉積。據(jù)2014年最新資料顯示,全球 IgAN的發(fā)病率為2.5人/10萬人/每年,約20%-50%的患者20年可進展為終末期腎臟病。但是, IgAN的發(fā)病機制仍然不十分清楚。因IgAN患者常在上呼吸道或腸道等粘膜感染后發(fā)生肉眼血尿和/或蛋白尿,提

2、示粘膜免疫與IgAN的發(fā)病機制密切相關(guān)。分泌型IgA(secretory IgA,SIgA)是參與粘膜免疫最重要的抗體,近年來的研究發(fā)現(xiàn),SIgA在 IgAN的發(fā)病中可能也起著一定的致病作用。IgAN的病理類型及臨床表現(xiàn)具有多樣性,是否因為有 SIgA的參與?SIgA可以沉積在 IgAN患者的系膜區(qū),那么它對系膜細胞具有損傷作用嗎?SIgA發(fā)揮這些致病損傷作用的機制是什么呢?迄今為止,還未見相關(guān)報道。MicroRNAs(miRNAs)是

3、真核生物中一類具有內(nèi)源性調(diào)控功能的非編碼RNA,它通過與靶基因信使 RNA(messenger RNA,mRNA)的3’端非編碼區(qū)(untranslated region,UTR)結(jié)合,發(fā)揮抑制翻譯的作用。研究提示,miRNAs在腎臟病中也起了重要的作用。那么SIgA是否通過作用miRNAs來發(fā)揮在IgAN中的致病性呢?
  第一部分、IgA腎病患者分泌型IgA在腎組織的沉積以及同臨床病理之間的關(guān)系
  目的:
  檢

4、測IgAN患者腎組織中SIgA沉積的比例;分析SIgA與臨床及腎臟病理之間的關(guān)系。
  方法:
  選取263名原發(fā)性IgAN患者,應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡觀察腎組織SIgA的沉積,并比較有SIgA沉積和無沉積患者的臨床及腎臟病理各項指標的不同。
  結(jié)果:
  1.263名IgAN患者中87名可見到系膜區(qū)SIgA的沉積,約占29.28%;
  2.同系膜區(qū)無SIgA沉積的病人相比較,有SIgA沉積的病人具有明

5、顯的感染史(P=0.016)及血尿(P=0.024)發(fā)生率,臨床指標上具有明顯低水平的血清胱抑素C(P=0.027)和β2微球蛋白(P=0.018),病理特征上具有更微的腎臟小管間質(zhì)損傷(P=0.030)和更低的T評分(牛津分型,P=0.026)。
  結(jié)論:
  粘膜免疫同IgAN密切相關(guān),SIgA參與了IgAN的發(fā)病,它在腎組織的沉積與某些的臨床腎臟病理指標相聯(lián)系。
  第二部分、分泌型IgA在IgAN患者腎組織激

6、活的補體通路研究
  目的:
  檢測IgAN患者腎組織中SIgA激活的補體通路來研究SIgA的腎損傷作用,以及比較腎組織經(jīng)不同補體途徑激活的IgAN患者之間的臨床病理特征。
  方法:
  選取87名原發(fā)性IgAN患者,應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡觀察腎組織SIgA以及各補體通路相關(guān)蛋白的沉積,探討SIgA與各補體通路激活的關(guān)系,并比較不同補體激活通路的患者臨床及腎病理特點之間的差別。
  結(jié)果:
  1.

7、87名IgAN患者中有22名可見到系膜區(qū)SIgA沉積,其中經(jīng)旁路途徑激活的占77.27%,在65名無SIgA沉積的患者中經(jīng)凝集素途徑激活的占72.30%,兩組比較無明顯差別(P=0.648);
  2.同腎組織經(jīng)凝集素途徑激活的患者相比較,經(jīng)旁路途徑激活的64人(73.6%)在臨床指標方面具有更低的腎小球濾過率(P=0.043),在腎病理方面腎小球硬化比例(P=0.035)、小管間質(zhì)損傷程度(P=0.030)、C3的免疫熒光強度(

8、P=0.012)以及牛津評分的S(P=0.006)和T評分(P=0.039)均損傷更嚴重。
  結(jié)論:
  在IgAN中SIgA具有致病性,可能通過激活旁路途徑和凝集素途徑造成腎損傷;經(jīng)旁路途徑激活的IgAN患者部分臨床和腎病理特征比經(jīng)凝集素途徑激活的患者嚴重。
  第三部分、分泌型IgA對系膜細胞的生物學(xué)效應(yīng)研究
  目的:
  研究SIgA對人系膜細胞的生物學(xué)效應(yīng),探討SIgA在IgAN中的致病作用。<

9、br>  方法:
  運用親和層析柱提純IgAN患者及正常人唾液中的SIgA,應(yīng)用親和層析柱和分子篩提純IgAN患者及正常人血中的多聚IgA(polymeric IgA,pIgA);將提純的SIgA及pIgA分別刺激人系膜細胞,檢測細胞的增殖及各種促炎促纖維化因子(IL-6、IL-8、MCP-1、TGF-β1和纖維粘連蛋白)在細胞中mRNA及蛋白水平的表達情況,并相互比較。
  結(jié)果:
  1.SIgA和pIgA均能使

10、人系膜細胞明顯增殖(P<0.05),表達IL-6、IL-8、MCP-1、TGF-β1和纖維粘連蛋白明顯增多(mRNA和蛋白水平,P<0.05),并且患者來源的SIgA和pIgA對細胞的上述生物學(xué)效應(yīng)均明顯強于正常人來源的刺激作用(P<0.05);
  2.經(jīng)IgAN患者唾液純化的SIgA對系膜細胞的增殖作用及刺激其分泌IL-6、IL-8和纖維粘連蛋白的作用要明顯弱于經(jīng)IgAN患者血清純化的pIgA作用(P<0.05)。
  

11、結(jié)論:
  在IgAN中SIgA有致病作用,SIgA具有刺激系膜細胞增殖和釋放促炎促纖維化細胞因子的生物學(xué)效應(yīng),并且SIgA與pIgA對系膜細胞的生物學(xué)效應(yīng)是不完全相同的。
  第四部分與分泌型IgA致病性有關(guān)的microRNAs篩選及驗證
  目的:
  篩選與SIgA致病性有關(guān)的miRNAs,研究SIgA在IgAN中產(chǎn)生致病性的分子機制。
  方法:
  運用Agilent human miRNA

12、s芯片,檢測經(jīng)IgAN患者及正常人SIgA刺激的系膜細胞中的miRNAs,并分析篩選其中差異性表達的miRNAs,應(yīng)用實時熒光定量PCR分別進行驗證。
  結(jié)果:
  1.通過miRNAs芯片篩選了17個經(jīng)IgAN患者及正常人的SIgA刺激后細胞內(nèi)差異表達的miRNAs,其中上調(diào)5個、下調(diào)12個;
  2.經(jīng)實時熒光定量 PCR驗證芯片篩選結(jié)果中的miRNAs,趨勢均一致,其中16個表達差異顯著(P<0.05),1個差

13、異性不顯著(P>0.05)。
  結(jié)論:
  SIgA在IgAN發(fā)揮致病性的機制中,miRNAs參與其中。
  第五部分miR-16-2-3p和miR-100-3p調(diào)控IL-6和IL-8的分子機制
  目的:
  預(yù)測和驗證了miR-16-2-3p和miR-100-3p的靶基因,進一步探討SIgA在IgAN中產(chǎn)生致病性的分子機制。
  方法:
  通過生物信息學(xué)方法對miRNAs芯片篩選結(jié)果中的

14、miR-16-2-3p和miR-100-3p進行靶基因預(yù)測,建立融合靶基因3‘UTR的熒光素酶報告基因載體,通過雙報告熒光素酶基因檢測方法確定miR-16-2-3p和miR-100-3p的靶基因;應(yīng)用實時熒光定量PCR和Western blot研究miR-16-2-3p和miR-100-3p對其靶基因的內(nèi)源性調(diào)控作用。
  結(jié)果:
  1.成功構(gòu)建了能夠過表達miR-16-2-3p和miR-100-3p的報告基因載體;

15、>  2.熒光素酶雙報告基因檢測顯示,miR-16-2-3p和miR-100-3p的復(fù)制物可以分別與報告基因載體的IL-6和IL-83’UTR野生序列結(jié)合,使載體的熒光素酶活性降低,而IL-6和IL-83’UTR突變序列不能產(chǎn)生這樣的作用(P<0.05);
  3.MiR-16-2-3p過表達可以抑制SIgA刺激系膜細胞中分泌IL-6蛋白過多的情況,但不影響IL-6 mRNA的水平(P>0.05),同樣miR-100-3p過表達可

16、以抑制其分泌IL-8蛋白過多的情況,但不能影響IL-8 mRNA的水平(P>0.05)。
  結(jié)論:
  MiR-16-2-3p的靶基因是IL-6,miR-100-3p的靶基因是IL-8;SIgA通過作用miR-16-2-3p和miR-100-3p來分別調(diào)控系膜細胞產(chǎn)生炎癥因子IL-6和IL-8,是SIgA在IgAN中產(chǎn)生致病性的分子機制之一。
  全文結(jié)論
  SIgA參與了IgAN的發(fā)病,它在腎組織的沉積同一

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