Akt及pAkt在IgA腎病中的作用.pdf

1、目的：IgA腎病(IgA nephropathy，IgAN)是最常見的原發(fā)性腎小球疾病，是IgA或以IgA為主的免疫球蛋白在腎小球系膜區(qū)及毛細(xì)血管袢沉積引起的一系列臨床和病理改變，臨床上多表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作性肉眼血尿或持續(xù)性鏡下血尿，可伴有不同程度的蛋白尿、高血壓和腎臟功能受損等；光鏡下IgA腎病最典型的改變是局灶性或彌漫性系膜區(qū)系膜細(xì)胞增殖及系膜基質(zhì)增多。約40％的患者在發(fā)病20年后發(fā)展為終末期腎病(ESRD)，然而，目前對疾病發(fā)展的分子

2、機(jī)制知之甚少。Akt在腎臟疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要的作用；Akt參與多種細(xì)胞因子的致纖維化過程，促進(jìn)腎臟系膜細(xì)胞的增殖抑制其凋亡，引起細(xì)胞外基質(zhì)的分泌增加；能抑制氧化應(yīng)激引起的腎小管上皮細(xì)胞的凋亡、促進(jìn)了上皮細(xì)胞間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，并參與了足細(xì)胞的損傷過程等。本實驗通過對IgA患者腎組織及外周血中Akt、磷酸化Akt(phosphorylated Akt，pAkt)的研究，了解不同病理分期的IgAN患者外周血及腎組織中Akt、磷酸化A

3、kt的變化；并將其表達(dá)水平與臨床、病理改變進(jìn)行相關(guān)分析，探討Akt及pAkt在IgA腎病發(fā)病機(jī)制中的作用，探討其在IgA腎病進(jìn)展中的作用，進(jìn)而為臨床腎纖維化的防治提供理論依據(jù)。
　　方法：河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院腎內(nèi)科2010年11月至2011年7月腎穿刺活檢診斷為IgA腎病的患者27例，(其中男性20例，女性7例，平均年齡為38.3±13.98歲)，并收集患者外周血(腎功能異常者除外)。除外狼瘡性腎炎、過敏性紫癜腎炎、乙肝病毒相關(guān)性

4、腎炎、高血壓腎損害、甲狀腺病相關(guān)性腎損害、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎腎損害、腫瘤相關(guān)性腎病等繼發(fā)性腎臟病患者，活檢前均未用過糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑等治療，并除外肥胖、妊娠、糖尿病、藥物等導(dǎo)致的腎損傷及急性間質(zhì)性腎炎等。根據(jù)2009年IgA腎病牛津分型腎小管萎縮間質(zhì)纖維化百分?jǐn)?shù)分為三個組：輕度：T0≤25％，中度：T126％～50％，重度：T2≥50％。免疫組化檢測IgA患者腎組織中Akt、pAkt的表達(dá)，并進(jìn)行病理圖像分析，計算陽性目標(biāo)表達(dá)指數(shù)。收

5、集6例健康體檢者外周血做對照組。外周血應(yīng)用密度梯度離心提取單個核細(xì)胞，裂解提取蛋白，Western blot檢測Akt、磷酸化Akt的表達(dá)。所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0軟件作統(tǒng)計學(xué)分析。搜集臨床資料：性別、年齡、24小時尿蛋白定量(24 hour urinary protein quantitative，Upro)、血清白蛋白(ALB)、評估腎小球濾過率(estimate glomerular filtration rate，eGFR)

6、。所得陽性目標(biāo)表達(dá)指數(shù)并與病理改變、臨床指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：1.臨床指標(biāo)：IgA患者共27例。年齡、腎小球濾過率各組相比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。24小時尿蛋白定量、血清ALB各組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。輕、中、重組腎小管萎縮間質(zhì)纖維化程度各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。2.Akt和pAkt在IgA腎病腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá)，Akt和pAkt表達(dá)量各組間有顯著差異(均P<0.05)，其表達(dá)

7、量隨腎小管萎縮間質(zhì)纖維化的加重呈明顯升高趨勢，Akt活性(即pAkt與Akt的比值)隨著腎小管萎縮間質(zhì)纖維化加重明顯增加。3.腎組織Akt活性與24小時尿蛋白定量、腎小管萎縮間質(zhì)纖維化程度成正相關(guān)(P<0.05)，與eGFR、ALB無相關(guān)性(P>0.05)。4.應(yīng)用Western blot方法對外周血單個核細(xì)胞裂解液中Akt、pAkt檢測，發(fā)現(xiàn)各組間的Akt水平無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.866)。IgA腎病組pAkt表達(dá)較正常組pAkt增多

8、，各組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且隨著病變的進(jìn)展持續(xù)在高水平。各組間Akt的活性均高于正常組，各組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
　　結(jié)論：1.Akt和pAkt在IgA腎病腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá)，Akt的活性隨著腎小管萎縮間質(zhì)纖維化的加重明顯升高，Akt活性隨著尿蛋白量增加、腎小管萎縮間質(zhì)纖維化程度加重而增加。2.IgA腎病外周血Akt的活性明顯高于正常對照組。3.Akt的活化參與了IgA腎病的發(fā)病及腎小管間質(zhì)纖