PPAR-γ在IgA腎病發(fā)生中的作用及其機理研究.pdf

1、目的:PPAR-γ作為配體依賴的核因子，除了經(jīng)典的調(diào)節(jié)糖、脂代謝作用外，其抗炎等作用近年受到廣泛關(guān)注。本研究運用牛血清γ球蛋白(bovine gammaglobulin，BGG)建立IgA腎病大鼠模型，并觀察PPAR-γ激動劑在本病發(fā)生中的作用及其與替米沙坦的協(xié)同治療效果和PPR-γ與TLR4的相互關(guān)系。
　　方法:77只雄性Lewis大鼠，體重40-55g，飼養(yǎng)溫度25℃，12h晝夜輪替，自由飲食，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機分為5組:

2、①對照組(Control，n=18):自由飲用6mmol/l的鹽酸酸化水;②IgA腎病組(IgAN，n=28):自由飲用含0.1％ BGG的6mmol/l鹽酸酸化水，連續(xù)9周，其后連續(xù)3天尾靜脈注射1mg BGG;③吡格列酮組(Pio，n=9):將吡格列酮藥片研磨成粉，每天取1g溶于90ml生理鹽水制成懸濁液，用前搖勻，按3ml/只灌胃4周;④吡格列酮+替米沙坦組(Pio+ARB，n=10):將吡格列酮、替米沙坦藥片研磨成粉，每天分別取

3、1g和0.3g溶于120ml生理鹽水制成懸濁液，用前搖勻，按3ml/只灌胃4周;⑤TLR4抑制劑組（TAK242，n=12）:將配置好的TLR4抑制劑TAK242脂肪乳劑按7.5ml/kg連續(xù)8天尾靜脈注射。分別于第4周末、第6周末、第9周末測各組大鼠尿白蛋白/肌酐(ACR)，顯微鏡下行尿紅細(xì)胞計數(shù)，腹主動脈采血檢測血肌酐和尿素氮，光鏡下觀察腎臟病理損害，用RT-PCR法檢測各組腎組織PPAR-γmRNA和TLR4 mRNA的表達，We

4、stern Blot方法檢測腎組織PPAR-γ蛋白、TLR4蛋白和IL-1β蛋白的表達情況，免疫熒光檢測腎小球IgA沉積情況。
　　結(jié)果:①第9周末造模結(jié)束后，模型組尿白蛋白/肌酐明顯高于對照組(4.45±1.33mg/mmol vs2.89±0.96mg/mmol，P=0.05)。尿紅細(xì)胞計數(shù)兩組無明顯差別。與對照組相比，模型組大鼠SCr、BUN、ALT、AST均無明顯變化（均P＞0.05）模型組大鼠與對照組相比，腎臟組織系膜細(xì)

5、胞及系膜基質(zhì)增生明顯，腎小球橫截面細(xì)胞數(shù)明顯增多（51±4個vs41±2個，P＜0.01），腎小球體積明顯增大，少數(shù)腎小管上皮細(xì)胞腫脹，間質(zhì)輕度炎性細(xì)胞浸潤。對照組腎小球免疫熒光未見IgA沉積，模型組腎小球可見亮綠色團塊狀或絮狀I(lǐng)gA沉積。②與對照組相比，IgA腎病組ACR明顯升高(1.72±0.41mg/mmol vs1.27±0.15mg/mmol)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.013);吡格列酮組尿ACR與對照組相比無明顯差異(1.

6、13±0.44mg/mmol vs1.27±0.15mg/mmol，P=0.41)但顯著低于IgA腎病組(1.13±0.44mg/mmol vs1.72±0.41mg/mmol，P=0.015);吡格列酮+替米沙坦組ACR與對照組相比無明顯差異（1.01±0.45mg/mmol vs1.27±0.15mg/mmol，P=0.41）但顯著低于IgA腎病組(1.01±0.45mg/mmol vs1.72±0.41mg/mmol，P=0.00

7、)。吡格列酮組與吡格列酮+替米沙坦組ACR無顯著差異（1.01mg/mmol±0.45 vs1.13±0.44mg/mmol，P=0.18）。與對照組相比，IgA腎病組腎小球橫截面細(xì)胞數(shù)量明顯增多（50±8個 vs40±6個，P=0.03），腎小球體積明顯增大，少數(shù)腎小管上皮細(xì)胞腫脹，間質(zhì)輕度炎性細(xì)胞浸潤;吡格列酮組與對照組相比腎小球橫截面細(xì)胞數(shù)量無明顯差異（46±6個vs40±6個，P＞0.05），吡格列酮組與IgA腎病組相比，腎小球

8、橫截面細(xì)胞數(shù)量減少未達到統(tǒng)計學(xué)意義（46±6個vs50±8個，P=0.23），腎小管基本正常，間質(zhì)未見明顯炎性細(xì)胞浸潤;吡格列酮+替米沙坦組與對照組相比腎小球橫截面細(xì)胞數(shù)量無明顯差異（41±4個vs40±6個，P＞0.05）但顯著低于IgA腎病組（41±4個vs50±8個，P=0.03）。與吡格列酮組相比，減少未達到統(tǒng)計學(xué)差異（41±4個vs46±6個，P=0.08），腎小管正常，間質(zhì)未見明顯炎性細(xì)胞浸潤。與對照組相比，IgA腎病組血清

9、IL-1β水平和腎組織IL-1β蛋白的表達均明顯升高（47.45±12.91pg/ml vs34.49±12.09pg/mI，P=0.01;0.46±0.21 vs0.27±0.10，P=0.04）;吡格列酮組與對照組相比血清IL-1β水平和腎組織IL-1β蛋白的表達均無明顯差異(39.06±17.92pg/ml vs34.49±12.09pg/ml，P＞0.05;0.32±0.15 vs0.27±0.10，P=0.45)，與IgA腎病

10、組相比，血清IL-1β水平和腎組織IL-1β蛋白的表達降低均無統(tǒng)計學(xué)差異(39.06±17.92pg/ml vs47.45±12.91pg/ml，P=0.30;0.32±0.15 vs0.46±0.21，P=0.19);吡格列酮+替米沙坦組與對照組相比，血清IL-1β的水平和腎組織IL-1β蛋白的表達基本相同(34.49±14.55pg/ml vs34.49±12.09pg/ml, P＞0.05;0.28±0.09 vs0.27±0.1

11、0, P=0.94)但均顯著低于IgA腎病組(34.49±14.55pg/ml vs47.45±12.91pg/ml，P=0.04;0.28±0.09 vs0.46±0.21，P=0.04)。與吡格列酮組相比，吡格列酮+替米沙坦組血清IL-1β和腎組織IL-1β蛋白的表達水平均未達到統(tǒng)計學(xué)差異(34.49±14.55pg/ml vs39.06±17.92pg/ml，P=0.59;0.28±0.09 vs0.32±0.15，P=0.46)

12、。與對照組相比，IgA腎病組大鼠腎組織PPAR-γ蛋白的表達明顯升高(0.64±0.14 vs0.42±0.04， P=0.03)，PPAR-γ mRNA的表達無顯著差異（1.20±0.42 vs0.98±0.03，P=0.39）;吡格列酮組與對照組相比，PPAR-γ蛋白和mRNA的表達均明顯增加(0.71±0.19vs0.42±0.04，P=0.03;1.58±0.20 vs0.98±0.03，P=0.001)。與IgA腎病組相比，吡

13、格列酮組PPAR-γ蛋白和mRNA的表達升高未達到統(tǒng)計學(xué)意義（0.71±0.19 vs0.64±0.14，P=0.44;1.58±0.20 vs1.20±0.42，P=0.15）;吡格列酮+替米沙坦組與對照組、IgA腎病組相比，PPAR-γ蛋白和mRNA的表達均無統(tǒng)計學(xué)差異（均P＞0.05）。與吡格列酮組相比，吡格列酮組+替米沙坦組PPAR-γ蛋白和mRNA的表達均明顯降低(0.56±0.08 vs0.71±0.19，P=0.047;1

14、.02±0.17 vs1.58±0.20，P=0.005)。③與IgA腎病組相比，TLR4抑制劑組ACR顯著降低(1.13±0.44mg/mmol vs1.72±0.41mg/mmol，P=0.015)，光鏡下系膜細(xì)胞和系膜基質(zhì)明顯減少，腎小球橫截面細(xì)胞數(shù)明顯降低（35±3個vs45±3個，P＜0.01），血清IL-1β和腎組織IL-1β蛋白的表達無統(tǒng)計學(xué)意義（30.20+4.93pg/ml vs32.99+5.64pg/ml，0.56

15、±0.22 vs0.63±0.17，均P＞0.05），PPAR-γ的蛋白表達明顯增加（0.86±0.20 vs0.65±0.13，P=0.03），PPAR-γ的mRNA表達無統(tǒng)計學(xué)差異(1.00±0.54 vs0.87±0.35，P=0.63)。與IgA腎病組相比，吡格列酮組TLR4蛋白的表達明顯降低（0.12±0.03 vs0.21±0.05，P=0.001），TLR4 mRNA的表達降低未達到統(tǒng)計學(xué)差異（0.78±0.21 vs0.

16、95±0.09，P=0.13）。
　　結(jié)論:①用口服BGG酸化水9周，尾靜脈注射BGG3天的方法可以建立輕-中度IgA腎病大鼠模型。②在IgA腎病動物模型中，PPAR-γ激動劑吡格列酮、血管緊張素受體阻斷劑替米沙坦均可以降低炎癥因子的水平，降低蛋白尿，抑制系膜細(xì)胞和系膜基質(zhì)的增殖，改善IgA腎病。替米沙坦對吡格列酮的協(xié)同治療效果不明顯。③TLR4抑制劑TAL242可以改善IgA腎病，降低蛋白尿，改善系膜細(xì)胞和系膜基質(zhì)的增殖，在Ig