巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子在IgA腎病大鼠模型腎損傷中的作用.pdf

1、目的： 1.研究巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)在IgA腎病大鼠腎組織中的表達(dá)及其與腎損傷的關(guān)系； 2.初步探討MIF在IgA腎病大鼠模型腎損傷中的可能作用機(jī)制； 3.觀察MIF抑制劑(ISO-1)抑制MIF表達(dá)后對(duì)IgA腎病大鼠模型腎損傷的保護(hù)作用。 方法：清潔級(jí)SD雌性性大鼠56只，經(jīng)尿常規(guī)檢查無(wú)異常后，隨機(jī)分成五組：正常對(duì)照組(A組)，模型對(duì)照組(B組)、ISO-1早干預(yù)組(C組)、ISO-1晚干預(yù)組

2、(D組)、地塞米松干預(yù)組(E組)。IgA腎病大鼠模型的制備及干預(yù)：實(shí)驗(yàn)第1天起隔日灌服牛血清白蛋白(BSA)400mg/kg，持續(xù)8周；第6周起尾靜脈注射牛血清白蛋白(BSA)20mg/kg，每周1次，連續(xù)3次；第6、8尾靜脈注射0.3mg/kg脂多糖(LPS)各一次；同時(shí)皮下注射四氯化碳0.1ml(每周一次，持續(xù)10周)，觀察至第12周。C組在出現(xiàn)較明顯的蛋白尿后，即第六周起予ISO-1200μg/kg隔日腹腔注射，連續(xù)4周；D組于造

3、模結(jié)束后，予ISO-1200μg/kg隔日腹腔注射，連續(xù)4周；E組于造模結(jié)束后，予地塞米松5mg/kg隔日腹腔注射，連續(xù)4周；A組及B組均以生理鹽水代替。全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)24小時(shí)尿蛋白、血肌酐(SCr)及尿素氮(BUN)；直接免疫熒光法觀察腎小球IgA的沉積情況；光鏡染色觀察腎組織病理改變；免疫組化法檢測(cè)腎組織ED-1、MIF及NF-kB/p65蛋白表達(dá)的變化；RT-PCR技術(shù)檢測(cè)腎組織MIFmRNA表達(dá)的變化。 結(jié)果：

4、 1.24h尿蛋白定量結(jié)果：B組大鼠于第五周末即開(kāi)始出現(xiàn)較明顯蛋白尿，并逐周增加，至第11、12周達(dá)高峰，后趨于穩(wěn)定，B組與A組比較有極顯著性差異(P＜0.01)。經(jīng)藥物干預(yù)后，C、D、E組大鼠尿蛋白均有不同程度減少，與B組相比均有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)，C組與D組比較有顯著差異(P＜0.05)，D、E兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)； 2.血腎功能結(jié)果：16周末，各組的SCr和BUN與A組相比均有顯

5、著性差異(P＜0.01或P＜0.05)；經(jīng)藥物干預(yù)后，C、D、E組SCr圾B(niǎo)UN均有不同程度改善與B組比較均有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)，c組與D組比較有顯著差異(P＜0.05)，D、E兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)； 3.腎組織免疫熒光結(jié)果：A組大鼠腎小球系膜區(qū)未見(jiàn)明顯IgA沉積，B組大鼠明顯可見(jiàn)腎小球系膜區(qū)彌漫、顆粒、團(tuán)塊樣IgA沉積，C組及D組腎小球系膜區(qū)IgA顆粒、團(tuán)塊樣沉積亦較明顯，E組腎小球系膜

6、區(qū)呈現(xiàn)少量細(xì)顆粒狀I(lǐng)gA沉積為主。各組大鼠小球IgA沉積強(qiáng)度與A組比較均有極顯著性差異(P＜0.01)，C、D兩組與B組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，E組與B組間有極顯著性差異(P＜0.01)，C組與D組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，D組與E組相比有顯著性差異(P＜0.05)； 4.腎組織光鏡觀察：A組腎小球系膜細(xì)胞及系膜基質(zhì)未見(jiàn)增生，毛細(xì)血管袢開(kāi)放良好，小管上皮細(xì)胞完整，無(wú)空泡變性，未見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。B組大鼠腎組織

7、可見(jiàn)腎小球基質(zhì)增多伴有系膜細(xì)胞增生，腎小囊腔變窄，部分腎小囊壁層上皮由扁平上皮變?yōu)榱⒎缴掀?，病變程度以輕中度為主，累及部分腎小球，個(gè)別大鼠可見(jiàn)有細(xì)胞性新月體形成，部分腎小管呈空泡變性，腎間質(zhì)可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。C、D、E組病變均有不同程度改善，系膜細(xì)胞及系膜基質(zhì)增生減少，腎小球及小管間質(zhì)的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少； 5.ED-1、MIF及NF-kB/p65蛋白免疫組化結(jié)果：A組大鼠腎組織僅見(jiàn)少量的ED-1、MIF及NF-kB/p65陽(yáng)性表

8、達(dá)，B組大鼠腎組織上述蛋白表達(dá)水平明顯升高，與A組相比均有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)；C、D、E組與B組相比表達(dá)均有不同程度的減少，有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)，C組與D組、D組與E組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)； 6.各組大鼠腎組織MIFmRNA表達(dá)的變化：A組大鼠腎組織可見(jiàn)少量MIFmRNA表達(dá)，B組表達(dá)明顯升高，與A組比較有極顯著性差異(P＜0.01)；C、D、E組在MIFmRNA表達(dá)方

9、面均較B組明顯下降，有顯著性差異(P＜0.01)，C組與D組、D組與E組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)； 7.相關(guān)性分析：大鼠腎組織MIFmRNA表達(dá)與MIF蛋白、ED-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和NF-kB/p65蛋白的表達(dá)之間存在正相關(guān)(r=0.671，0.711，0.687，P＜0.01)：腎組織MIF蛋白與ED-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和INF-kB/p65蛋白的表達(dá)之間存在正相關(guān)(r=0.766，0.763，P＜0.01)。 結(jié)論

10、： 1.MIF在IgA腎病大鼠腎組織中表達(dá)升高，并與腎組織炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)程度相一致，提示其在IgA腎病大鼠模型腎損傷的中起重要作用； 2.MIF在IgA腎病大鼠腎損傷中的作用機(jī)制可能與活化NF-kB有關(guān)； 3.MIF抑制劑ISO-1可以下調(diào)MIF在腎組織的表達(dá)，減輕IgA腎病大鼠腎病理?yè)p傷程度、減少蛋白尿及保護(hù)腎功能的作用； 4.與地塞米松不同，ISO-1治療不影響IgA在腎小球系膜區(qū)的沉積，MIF可能通