蠟樣芽孢桿菌綠色熒光蛋白標(biāo)記及其在小麥上定殖的初探.pdf

1、蠟樣芽孢桿菌A-47、M-22、83-6等八個(gè)菌株(Bacillus cereus M-22,A-47,83-6,et al.)是該研究室從植物體內(nèi)分離的對(duì)多種作物有良好防病、促生、改善品質(zhì)、提高抗逆性的有益內(nèi)生芽孢桿菌.前期的研究表明它們可以在多種植物體內(nèi)定殖,但是對(duì)其在植物體表定殖的方式及進(jìn)入植物體內(nèi)的方式、途徑、在植物體內(nèi)的分布以及其在自然環(huán)境中的生態(tài)分布尚不清楚.該研究試圖應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)—綠色熒光蛋白(Green fluor

2、escent protein,GFP)對(duì)其進(jìn)行標(biāo)記,并以A-47為例就其在小麥體表的定殖情況進(jìn)行研究.將來(lái)自質(zhì)粒pAD4412的啟動(dòng)子和gfpmut3a基因插入大腸桿菌—芽孢桿菌穿梭載體pBE2,構(gòu)建出芽孢桿菌表達(dá)GFP的載體pGFP4412,用其轉(zhuǎn)化野生型生防芽孢桿菌83-6和A-47等8個(gè)芽孢桿菌菌株,均得到良好的發(fā)光表型.質(zhì)粒穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)(以A-47為例,連續(xù)稀釋培養(yǎng)5次)表明重組質(zhì)粒pGFP4412穩(wěn)定性為92﹪.認(rèn)為新構(gòu)建的基因

3、工程菌可以滿足作物特定生育期甚至一年生作物全生育期研究的需要.借助落射式熒光顯微鏡對(duì)GFP標(biāo)記的菌株A-47-gfp在小麥體表的定殖進(jìn)行觀察.GFP標(biāo)記的芽孢桿菌經(jīng)藍(lán)光激發(fā)而發(fā)出亮綠色熒光,細(xì)菌的形態(tài)清晰可辨,土壤或植物土著菌因不能發(fā)出綠色熒光而觀察不到,所以土著菌不會(huì)干擾檢測(cè).土壤顆粒發(fā)出的熒光呈現(xiàn)為黃色或褐色,偶爾為紅色,并且由于土壤顆粒的輪廓與細(xì)菌的輪廓有明顯的區(qū)別,所以呈亮綠色的菌體可以明顯的被區(qū)分出來(lái).小麥葉片及莖桿在藍(lán)光激發(fā)