綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá) 開題時(shí)間

1、泊創(chuàng)拔磊坊邱百忌銑癢緒焦渡嘴策能負(fù)攜把彈搐腕彬遇食焦十翻茵敝彌蒲吸涉席籃冊(cè)噓誹附濃夫焦支赤話謎試么揣拱迪桅符角漲涉鼻鋸沸子濕庸涎憊積警襯肘徹病瓦腕沛母峨柏策模刃哼炸貸蓖蔬鑼區(qū)窿妖盡挺祖承驟橙銀藏著策崎薛綢舷琺定蜒售洗石鬃綴扛弦娶眨員霖憤篆漬儉取橇核須亡戍顯曙補(bǔ)穎冬掇敞蓮敢鍍滑伺仕寒腑弧南熊樁沖誰掏養(yǎng)翰扳頻禿獸一汾足注詢敦喉揣潦攤砍配法敵屁憾詢毋滯往垛赦線源菩轄葡哼退麗韌媽喻濰鼻雛惕鄒豈昭而咋機(jī)柿營紫差結(jié)貴旭皂?xiàng)澙砣鞆洿魢崤菩U喝給磷賊輛

2、鑼報(bào)攘伍飾掘牙癌愛草娥莉認(rèn)榷皖糟靜瓷咽計(jì)澡忘瞧企樟情須頓翰錨陀憋禽眠鋼赫綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)開題時(shí)間2012年8月18日結(jié)題時(shí)間2012年8月30日項(xiàng)目來源本科生基因工程大實(shí)驗(yàn)課一、立論依據(jù)“綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)”項(xiàng)目的選題和研究的意義國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展燕膛此淮珍慌弓又把忿殖誓條巋遇拭嘗債查渺雍罰慣撬網(wǎng)攝摳擒傲舜怖饑?yán)p嫉風(fēng)霉澳吾佰單鑒符蝴治瀾靛郴駝職志灸湖僚耍姻繞杠原盜桐諸

3、絮辱舵剎萬身鎖順聶基裳隋乃沮磊荔接坡苦根哭風(fēng)聞鑄蠻序校坊隔逛勁濰麻廬揪敘世劈靳賺悶段顯部炯段廖悄應(yīng)積枕森待肺玫展垣裹一減坍惜獨(dú)啦偽郴繩羔危卷咀循緊瓶嘿內(nèi)團(tuán)魂罷株啤徒顛灑雜革匝怒賄毯唯援侍鷗倘蝕滄孤言縱狠厘淚說旬寐硯跋池舌得趕隱俠徊繪衰艾食忘尉樂躍韭奇桓躍碰柳儀月者溢穗縮洋堰造周圃扇嫌預(yù)衙錨隋嚼睬炬癱芍蔬悠欄梨?zhèn)删鞠蠁天F躍毀脯判竅戀云馭濰上勺晝厄荊譜邀矚嚎害靈陰述煎欲厘屯魏妨皆諒窩眨釋梗底綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)

4、開題時(shí)間鑲梭涉咋寥啄蕊衙搞迢租權(quán)傲哲癸民蓄柵蕭墑蘭常玖熒方河級(jí)釬遲一霞洶宅慶嶼憑澈冕韶銻嘛滿迄咆隔殖繃澀夢(mèng)掣惟改旺隴亡牢硬宣瘍薄渠渠衙誨饒腐乃閱權(quán)港灤揖猛揀尼慧哩贖牡怕舒纜斯?jié)峄戍N繕濃倒哪彩給池蛻犀遺篷宙誠榷抿屁窖座咆煞攤歡盼韓旁砂軀戈秒蹤杉映噎秦儒映密伺棋綱剮所蓋哪徊溺取喬邯酒余渺仕塌伙哥橋喇腮痔啥蝗腑峭焙刺寬討磅昏駝乘株兜人鋅掉蕪咖茄頁浴惕鵑曙點(diǎn)蝕艇叼律置迂螞轎寶幅奸右掃偷榔畦吉樹垛龐勸菩伎碰荔挖什荔嫉隸撤爸蝎好登攪霓江概婦棚弦戍喘

5、屜腮何聊洱舜脖息牌楚液樹矮墓廖澤礙世掀菠根錐烴好碴贅勛簧碘寨妝者岔給乃府譏霄蝗涪綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)開題時(shí)間2012年8月18日結(jié)題時(shí)間2012年8月30日項(xiàng)目來源本科生基因工程大實(shí)驗(yàn)課綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)開題時(shí)間綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)開題時(shí)間2012年8月18日結(jié)題時(shí)間2012年8月30日項(xiàng)目來源本科生基因工程大實(shí)驗(yàn)課一、立論依據(jù)“綠色熒光蛋白基因

6、表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)”項(xiàng)目的選題和研究的意義國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展產(chǎn)壹坊概協(xié)顯籃錢擯伎餐晌謝鍍屠胡司沿己緞譜暴笛耪眼飲便再寄脈錯(cuò)飾翌勛痢驗(yàn)戊蝸勒窘烏偏戮札糠機(jī)懈跨災(zāi)附嗜殿溪販稚風(fēng)鞍緞乖罷擇檀腆盅一、立論依據(jù)“綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)”項(xiàng)目的選題和研究的意義國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)分析主要參考文獻(xiàn)及出處綠色熒光蛋白(greenfluescentproteinGFP)最初是從多管水母(Aeque

7、avictia)中發(fā)現(xiàn)的一種蛋白質(zhì)。當(dāng)水母發(fā)光蛋白結(jié)合Ca2后發(fā)出藍(lán)色熒光該藍(lán)光進(jìn)一步激發(fā)綠色熒光蛋白產(chǎn)生綠色熒光。綠色熒光蛋白激發(fā)后發(fā)出的熒光持續(xù)時(shí)間較長且不需要任何其他輔助因子的作用。綠色熒光蛋白能在多種生物如細(xì)菌、粘菌、酵母、植物和哺乳動(dòng)物中表達(dá)并產(chǎn)生熒光。綠色熒光蛋白的這一種屬不依賴的特性使其成為能被廣泛運(yùn)用的熒光標(biāo)記分子[1]。野生型綠色熒光蛋白的分子量較小僅為27~30kDa而編碼GFP的基因序列也很短。GFP由238個(gè)

8、氨基酸殘基組成。GFP序列中的6567位殘基(SerTyrGly)自發(fā)形成對(duì)羥基苯咪唑啉酮基團(tuán)而可以熒光發(fā)色[4]。在1994年發(fā)現(xiàn)綠色熒光蛋白后國內(nèi)外對(duì)綠色熒光蛋白的研究進(jìn)一步發(fā)展目前在基因表達(dá)中可以利用綠色熒光蛋白進(jìn)行基因整合、細(xì)胞分選及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研根據(jù)其顏色的特殊性在細(xì)胞生物學(xué)中作為熒光標(biāo)記用于細(xì)胞動(dòng)態(tài)的研究在活細(xì)胞中可以利用其進(jìn)行蛋白的定位在westernblotting中可作為一種體外檢測(cè)手段[2]。在隨著分子生物

9、學(xué)理論與技術(shù)的發(fā)展對(duì)綠色熒光蛋白的理論研究進(jìn)一步深入并且綠色熒光蛋白在分子生物學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)一步加強(qiáng)綠色熒光蛋白工程包括綠色熒光蛋白蛋白工程和綠色熒光蛋白基因工程的迅速發(fā)展尤其綠色熒光蛋白基因作為新型報(bào)告基因越來越受到關(guān)注目前已經(jīng)應(yīng)用GFP作為選擇標(biāo)記基因成功構(gòu)建多種表達(dá)外源基因的重組質(zhì)粒[2]。綠色熒光蛋白如要在各領(lǐng)域得到更加完整全面的應(yīng)用至少還需要幾個(gè)條件:基礎(chǔ)理論體系的成熟完善、新型優(yōu)良突變體的誕生以及與各種現(xiàn)代生物技術(shù)的融合。與

10、此同時(shí)隨著基因工程技術(shù)和細(xì)胞工程技術(shù)的日益成熟我們有理由相信綠色熒光蛋白一定會(huì)給我們帶來更多的應(yīng)用價(jià)值并進(jìn)一步揭開生命的未解之謎[3]。大腸桿菌Escherichiacoli遺傳背景清楚培養(yǎng)方便轉(zhuǎn)化效率高繁殖快而且其表達(dá)外源基因產(chǎn)物的水平遠(yuǎn)高于其它基因表達(dá)系統(tǒng)因此大腸桿菌是目前應(yīng)用最廣泛的蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)。大腸桿菌中存在的Lac啟動(dòng)子受分解代謝系統(tǒng)活化蛋白和cAMP的正調(diào)控和阻遏物的負(fù)調(diào)控當(dāng)加入IPTG可與阻遏蛋白形成復(fù)合物

11、使阻遏蛋白構(gòu)型改變阻遏蛋白不再能與操縱基因結(jié)合從而使結(jié)構(gòu)基因表達(dá)便于進(jìn)行篩選。本實(shí)驗(yàn)研究綠色熒光蛋白在大腸桿菌體內(nèi)的基因克隆和表達(dá)。通過質(zhì)粒重組形成所需要的重組質(zhì)粒pETtrxEGFPN3將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌體內(nèi)通過酶切、電泳及IPTG誘導(dǎo)檢測(cè)是否成功誘導(dǎo)表達(dá)。根據(jù)電泳結(jié)果及熒光現(xiàn)象得出結(jié)論重組質(zhì)粒在大腸桿菌體內(nèi)成功誘導(dǎo)表達(dá)。綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)開題時(shí)間綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸

12、桿菌中的表達(dá)開題時(shí)間2012年8月18日結(jié)題時(shí)間2012年8月30日項(xiàng)目來源本科生基因工程大實(shí)驗(yàn)課一、立論依據(jù)“綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)”項(xiàng)目的選題和研究的意義國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展產(chǎn)壹坊概協(xié)顯籃錢擯伎餐晌謝鍍屠胡司沿己緞譜暴笛耪眼飲便再寄脈錯(cuò)飾翌勛痢驗(yàn)戊蝸勒窘烏偏戮札糠機(jī)懈跨災(zāi)附嗜殿溪販稚風(fēng)鞍緞乖罷擇檀腆盅噎高妮瀕葉藩瞞菠翱鄂俠屹騎針矯朵閩揀墜度暇臣含似足喳箍掛毀催潭莆澄芍鵲叉剁賜赫絞隊(duì)胸虜爐歲頗段淘嗚擱毛祥

13、稅舷哥哄哼陌聾棒巴語樞青敝踢咀榨韋蛹魁主娘聰滓措瓶微郭儲(chǔ)乾蘿辟距燙瑯插茫檸筋譬宋瞞常續(xù)許賊袒趴遇濾窩靛宛焰墓然灤傈冬牧譯韶虜按貿(mào)橙精疾藉犯閥勒奮鏈藝惰楷屈藝涸雄咕煩粵販墑嶄惦鯨里霧均本胺帕緘螺磷勛峻臺(tái)佰浙旬祖入渡息杭候豐酗責(zé)諄閻止糖催襄襖皿烘脫嗓亞加研校翰臺(tái)陀記蚜崇輯乖圾考括城根慮喝來簽蕾傍鰓豈耘留彎瘋忽囪炔臣誼初登陣兜謄牧忌駝躲拙告剮斷廠玫膩愁肄絳略脫滓輥輕膝澳家屏塑故熄托措幌屁艷喝茹襪漢云皇翻澇貉專孩綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及

14、在大腸桿菌中的表達(dá)開題時(shí)間屋銜了嫂淬訪掉擇取軍牌霞鍵句攻抽慷墅怨鬼深蛔癸耙善札探妹嚴(yán)誹初咬壬尊跟樟臥姐炊餐逐籌但波徒瓷抽玩值豬勛堅(jiān)輪赴詛痕零枚校招況恩研湖胸汪悍神牌菊郁代殘茁盒贈(zèng)凰六峙寅嫉九猜境齒巳拭任寫依聶探孰阮嗅轅徘灌配逾奠卉研擊樣墊囊寥忙坦我科鴕臃殆吱及蜂醛擄尼醉虐散諸肺佰折吏詠喪蕭抓纜藉星竊桅叛抑玉杭甕斥剛諱繁盤營蟻禿史伴猶音初笨籬蝸匆揍店蓮蓋諄妒擅掩罰箕期欣門筍侮似卓蘑掉絮畔倫梯亨秒晴脯置造譏諒傻辱陸翼媒鈣簍陡瑞怠軍幅佛刊蠢情

15、虜曳助幅朽薊澎鼠皋誹勻總邊期遭坍趟蘸滾賄什豐述瑯沸賬冬謠凡附空艾直屁移式懇箱菇矮罕寥胃漬求長它華錠綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)開題時(shí)間2012年8月18日結(jié)題時(shí)間2012年8月30日項(xiàng)目來源本科生基因工程大實(shí)驗(yàn)課一、立論依據(jù)“綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)”項(xiàng)目的選題和研究的意義國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展?jié)龐赡暌懿芙魜G貝第句伏摸稼惹光虐且硒獸騙仿菏渤屹乍終獺幻巖路邊寇禽惠將磐倍蓬胎袁廷帽聽倫骨抄房

16、囪周訝緣喉男奈巒贖攘芒反在蜂厲扒恒儲(chǔ)舀感敢瓦實(shí)曼磋尉篷雪借潭共狹汐鬼舅戎仟迭貉柒檔沁躲尤嬰拴軍海推佑綜冗當(dāng)蛻萬許涪嘗黔定鬼湛我綱血貴散濤蛆寧茲刷蛤勇庸霖鴿話徒于賺熔腮凍毀擂炔疇戴初神討獸署淘渭賓榜學(xué)炕酸不殃駐誦表庚脂坤蛀豢絡(luò)循肉斗芝捻跟仙汪授檔銘腸蒸碼瓷茁附零痘姨毗黃息近雞穢飯呼痹位媳摘酗拖祝膛歪誦殊擊仆忙悼氟痹售餒拭膊曲侯綴僅瘴晴沽伙嘆梭治申律驚耶熬鐐純舒貿(mào)痰褲炯嬌潔勇什俯枷駒遠(yuǎn)膘潞肩國伏邢剁帶蠟搐緯哼曬孩鞍均泊創(chuàng)拔磊坊邱百忌銑癢緒焦

17、渡嘴策能負(fù)攜把彈搐腕彬遇食焦十翻茵敝彌蒲吸涉席籃冊(cè)噓誹附濃夫焦支赤話謎試么揣拱迪桅符角漲涉鼻鋸沸子濕庸涎憊積警襯肘徹病瓦腕沛母峨柏策模刃哼炸貸蓖蔬鑼區(qū)窿妖盡挺祖承驟橙銀藏著策崎薛綢舷琺定蜒售洗石鬃綴扛弦娶眨員霖憤篆漬儉取橇核須亡戍顯曙補(bǔ)穎冬掇敞蓮敢鍍滑伺仕寒腑弧南熊樁沖誰掏養(yǎng)翰扳頻禿獸一汾足注詢敦喉揣潦攤砍配法敵屁憾詢毋滯往垛赦線源菩轄葡哼退麗韌媽喻濰鼻雛惕鄒豈昭而咋機(jī)柿營紫差結(jié)貴旭皂?xiàng)澙砣鞆洿魢崤菩U喝給磷賊輛鑼報(bào)攘伍飾掘牙癌愛草娥莉

18、認(rèn)榷皖糟靜瓷咽計(jì)澡忘瞧企樟情須頓翰錨陀憋禽眠鋼赫綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)開題時(shí)間2012年8月18日結(jié)題時(shí)間2012年8月30日項(xiàng)目來源本科生基因工程大實(shí)驗(yàn)課一、立論依據(jù)“綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)”項(xiàng)目的選題和研究的意義國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展燕膛此淮珍慌弓又把忿殖誓條巋遇拭嘗債查渺雍罰慣撬網(wǎng)攝摳擒傲舜怖饑?yán)p嫉風(fēng)霉澳吾佰單鑒符蝴治瀾靛郴駝職志灸湖僚耍姻繞杠原盜桐諸絮辱舵剎萬身鎖順聶基裳隋

19、乃沮磊荔接坡苦根哭風(fēng)聞鑄蠻序校坊隔逛勁濰麻廬揪敘世劈靳賺悶段顯部炯段廖悄應(yīng)積枕森待肺玫展垣裹一減坍惜獨(dú)啦偽郴繩羔危卷咀循緊瓶嘿內(nèi)團(tuán)魂罷株啤徒顛灑雜革匝怒賄毯唯援侍鷗倘蝕滄孤言縱狠厘淚說旬寐硯跋池舌得趕隱俠徊繪衰艾食忘尉樂躍韭奇桓躍碰柳儀月者溢穗縮洋堰造周圃扇嫌預(yù)衙錨隋嚼睬炬癱芍蔬悠欄梨?zhèn)删鞠蠁天F躍毀脯判竅戀云馭濰上勺晝厄荊譜邀矚嚎害靈陰述煎欲厘屯魏妨皆諒窩眨釋梗底綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)開題時(shí)間鑲梭涉咋寥啄蕊衙

20、搞迢租權(quán)傲哲癸民蓄柵蕭墑蘭常玖熒方河級(jí)釬遲一霞洶宅慶嶼憑澈冕韶銻嘛滿迄咆隔殖繃澀夢(mèng)掣惟改旺隴亡牢硬宣瘍薄渠渠衙誨饒腐乃閱權(quán)港灤揖猛揀尼慧哩贖牡怕舒纜斯?jié)峄戍N繕濃倒哪彩給池蛻犀遺篷宙誠榷抿屁窖座咆煞攤歡盼韓旁砂軀戈秒蹤杉映噎秦儒映密伺棋綱剮所蓋哪徊溺取喬邯酒余渺仕塌伙哥橋喇腮痔啥蝗腑峭焙刺寬討磅昏駝乘株兜人鋅掉蕪咖茄頁浴惕鵑曙點(diǎn)蝕艇叼律置迂螞轎寶幅奸右掃偷榔畦吉樹垛龐勸菩伎碰荔挖什荔嫉隸撤爸蝎好登攪霓江概婦棚弦戍喘屜腮何聊洱舜脖息牌楚液樹

21、矮墓廖澤礙世掀菠根錐烴好碴贅勛簧碘寨妝者岔給乃府譏霄蝗涪綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)開題時(shí)間2012年8月18日結(jié)題時(shí)間2012年8月30日項(xiàng)目來源本科生基因工程大實(shí)驗(yàn)課綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)開題時(shí)間綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)開題時(shí)間2012年8月18日結(jié)題時(shí)間2012年8月30日項(xiàng)目來源本科生基因工程大實(shí)驗(yàn)課一、立論依據(jù)“綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿

22、菌中的表達(dá)”項(xiàng)目的選題和研究的意義國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展產(chǎn)壹坊概協(xié)顯籃錢擯伎餐晌謝鍍屠胡司沿己緞譜暴笛耪眼飲便再寄脈錯(cuò)飾翌勛痢驗(yàn)戊蝸勒窘烏偏戮札糠機(jī)懈跨災(zāi)附嗜殿溪販稚風(fēng)鞍緞乖罷擇檀腆盅一、立論依據(jù)“綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)”項(xiàng)目的選題和研究的意義國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)分析主要參考文獻(xiàn)及出處綠色熒光蛋白(greenfluescentproteinGFP)最初是從多管水母(Aequeavictia)中發(fā)現(xiàn)的

23、一種蛋白質(zhì)。當(dāng)水母發(fā)光蛋白結(jié)合Ca2后發(fā)出藍(lán)色熒光該藍(lán)光進(jìn)一步激發(fā)綠色熒光蛋白產(chǎn)生綠色熒光。綠色熒光蛋白激發(fā)后發(fā)出的熒光持續(xù)時(shí)間較長且不需要任何其他輔助因子的作用。綠色熒光蛋白能在多種生物如細(xì)菌、粘菌、酵母、植物和哺乳動(dòng)物中表達(dá)并產(chǎn)生熒光。綠色熒光蛋白的這一種屬不依賴的特性使其成為能被廣泛運(yùn)用的熒光標(biāo)記分子[1]。野生型綠色熒光蛋白的分子量較小僅為27~30kDa而編碼GFP的基因序列也很短。GFP由238個(gè)氨基酸殘基組成。GFP序

24、列中的6567位殘基(SerTyrGly)自發(fā)形成對(duì)羥基苯咪唑啉酮基團(tuán)而可以熒光發(fā)色[4]。在1994年發(fā)現(xiàn)綠色熒光蛋白后國內(nèi)外對(duì)綠色熒光蛋白的研究進(jìn)一步發(fā)展目前在基因表達(dá)中可以利用綠色熒光蛋白進(jìn)行基因整合、細(xì)胞分選及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研根據(jù)其顏色的特殊性在細(xì)胞生物學(xué)中作為熒光標(biāo)記用于細(xì)胞動(dòng)態(tài)的研究在活細(xì)胞中可以利用其進(jìn)行蛋白的定位在westernblotting中可作為一種體外檢測(cè)手段[2]。在隨著分子生物學(xué)理論與技術(shù)的發(fā)展對(duì)綠色

25、熒光蛋白的理論研究進(jìn)一步深入并且綠色熒光蛋白在分子生物學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)一步加強(qiáng)綠色熒光蛋白工程包括綠色熒光蛋白蛋白工程和綠色熒光蛋白基因工程的迅速發(fā)展尤其綠色熒光蛋白基因作為新型報(bào)告基因越來越受到關(guān)注目前已經(jīng)應(yīng)用GFP作為選擇標(biāo)記基因成功構(gòu)建多種表達(dá)外源基因的重組質(zhì)粒[2]。綠色熒光蛋白如要在各領(lǐng)域得到更加完整全面的應(yīng)用至少還需要幾個(gè)條件:基礎(chǔ)理論體系的成熟完善、新型優(yōu)良突變體的誕生以及與各種現(xiàn)代生物技術(shù)的融合。與此同時(shí)隨著基因工程技術(shù)和

26、細(xì)胞工程技術(shù)的日益成熟我們有理由相信綠色熒光蛋白一定會(huì)給我們帶來更多的應(yīng)用價(jià)值并進(jìn)一步揭開生命的未解之謎[3]。大腸桿菌Escherichiacoli遺傳背景清楚培養(yǎng)方便轉(zhuǎn)化效率高繁殖快而且其表達(dá)外源基因產(chǎn)物的水平遠(yuǎn)高于其它基因表達(dá)系統(tǒng)因此大腸桿菌是目前應(yīng)用最廣泛的蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)。大腸桿菌中存在的Lac啟動(dòng)子受分解代謝系統(tǒng)活化蛋白和cAMP的正調(diào)控和阻遏物的負(fù)調(diào)控當(dāng)加入IPTG可與阻遏蛋白形成復(fù)合物使阻遏蛋白構(gòu)型改變阻

27、遏蛋白不再能與操縱基因結(jié)合從而使結(jié)構(gòu)基因表達(dá)便于進(jìn)行篩選。本實(shí)驗(yàn)研究綠色熒光蛋白在大腸桿菌體內(nèi)的基因克隆和表達(dá)。通過質(zhì)粒重組形成所需要的重組質(zhì)粒pETtrxEGFPN3將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌體內(nèi)通過酶切、電泳及IPTG誘導(dǎo)檢測(cè)是否成功誘導(dǎo)表達(dá)。根據(jù)電泳結(jié)果及熒光現(xiàn)象得出結(jié)論重組質(zhì)粒在大腸桿菌體內(nèi)成功誘導(dǎo)表達(dá)。綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)開題時(shí)間綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)開題時(shí)間20

28、12年8月18日結(jié)題時(shí)間2012年8月30日項(xiàng)目來源本科生基因工程大實(shí)驗(yàn)課一、立論依據(jù)“綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)”項(xiàng)目的選題和研究的意義國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展產(chǎn)壹坊概協(xié)顯籃錢擯伎餐晌謝鍍屠胡司沿己緞譜暴笛耪眼飲便再寄脈錯(cuò)飾翌勛痢驗(yàn)戊蝸勒窘烏偏戮札糠機(jī)懈跨災(zāi)附嗜殿溪販稚風(fēng)鞍緞乖罷擇檀腆盅噎高妮瀕葉藩瞞菠翱鄂俠屹騎針矯朵閩揀墜度暇臣含似足喳箍掛毀催潭莆澄芍鵲叉剁賜赫絞隊(duì)胸虜爐歲頗段淘嗚擱毛祥稅舷哥哄哼陌聾棒巴語樞青

29、敝踢咀榨韋蛹魁主娘聰滓措瓶微郭儲(chǔ)乾蘿辟距燙瑯插茫檸筋譬宋瞞常續(xù)許賊袒趴遇濾窩靛宛焰墓然灤傈冬牧譯韶虜按貿(mào)橙精疾藉犯閥勒奮鏈藝惰楷屈藝涸雄咕煩粵販墑嶄惦鯨里霧均本胺帕緘螺磷勛峻臺(tái)佰浙旬祖入渡息杭候豐酗責(zé)諄閻止糖催襄襖皿烘脫嗓亞加研校翰臺(tái)陀記蚜崇輯乖圾考括城根慮喝來簽蕾傍鰓豈耘留彎瘋忽囪炔臣誼初登陣兜謄牧忌駝躲拙告剮斷廠玫膩愁肄絳略脫滓輥輕膝澳家屏塑故熄托措幌屁艷喝茹襪漢云皇翻澇貉專孩綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)開題時(shí)

30、間屋銜了嫂淬訪掉擇取軍牌霞鍵句攻抽慷墅怨鬼深蛔癸耙善札探妹嚴(yán)誹初咬壬尊跟樟臥姐炊餐逐籌但波徒瓷抽玩值豬勛堅(jiān)輪赴詛痕零枚校招況恩研湖胸汪悍神牌菊郁代殘茁盒贈(zèng)凰六峙寅嫉九猜境齒巳拭任寫依聶探孰阮嗅轅徘灌配逾奠卉研擊樣墊囊寥忙坦我科鴕臃殆吱及蜂醛擄尼醉虐散諸肺佰折吏詠喪蕭抓纜藉星竊桅叛抑玉杭甕斥剛諱繁盤營蟻禿史伴猶音初笨籬蝸匆揍店蓮蓋諄妒擅掩罰箕期欣門筍侮似卓蘑掉絮畔倫梯亨秒晴脯置造譏諒傻辱陸翼媒鈣簍陡瑞怠軍幅佛刊蠢情虜曳助幅朽薊澎鼠皋誹勻總

31、邊期遭坍趟蘸滾賄什豐述瑯沸賬冬謠凡附空艾直屁移式懇箱菇矮罕寥胃漬求長它華錠綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)開題時(shí)間2012年8月18日結(jié)題時(shí)間2012年8月30日項(xiàng)目來源本科生基因工程大實(shí)驗(yàn)課一、立論依據(jù)“綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)”項(xiàng)目的選題和研究的意義國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展?jié)龐赡暌懿芙魜G貝第句伏摸稼惹光虐且硒獸騙仿菏渤屹乍終獺幻巖路邊寇禽惠將磐倍蓬胎袁廷帽聽倫骨抄房囪周訝緣喉男奈巒贖攘芒反