重鉻酸鉀對人肺上皮細胞hOGG1及hMTH1基因表達的影響.pdf

1、惡性腫瘤是危害人類健康的嚴重疾病之一，近年來其發(fā)病率與死亡率均呈上升趨勢。我國每年癌癥發(fā)病人數(shù)約達170萬，每年因癌癥死亡的人數(shù)達150萬，已經(jīng)超過心腦血管疾病成為致死原因的第1位。 肺癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一。其在我國國內(nèi)為十大癌癥死亡原因之一，且呈逐年增加的趨勢。研究表明六價鉻化合物是一種對人類有致癌性的物質(zhì)，它可經(jīng)經(jīng)呼吸道進入并沉積于肺臟，肺臟是其引起組織損傷和致癌的主要靶器官。流行病學研究結(jié)果表明職業(yè)性鉻暴露與職業(yè)

2、性肺癌有密切關系，六價鉻化合物已被國際癌癥研究中心(International．Agency for Research on Cancer，IARC)明確為人類致癌物(IARC1990資料)． 肺癌發(fā)病的主要機制是各種致癌物通過不同的方式誘發(fā)呼吸道上皮細胞DNA的損傷，導致一些相關基因的變化，從而導致細胞遺傳信息的改變，細胞轉(zhuǎn)化和癌變。鉻酸鹽致癌的詳細機理目前尚不清楚，DNA的損傷和修復，在細胞癌變的過程中起著關鍵的作用；有資料

3、顯示，鉻能產(chǎn)生低劑量興奮效應(hormesis)現(xiàn)象。所謂hormesis現(xiàn)象，即任何作用因子當以低于有害劑量作用于生物機體時，會產(chǎn)生某種興奮作用，表現(xiàn)為促進機體生長發(fā)育、延長壽命，也可以增強防御能力及其對損傷的修復。低劑量興奮效應的作用機制目前不太清楚，有學者認為低劑量作用因子可增加修復能力，與修復基因的表達有密切關系。研究顯示，堿基切除修復(Base Excision Repair,BER)是哺乳動物切除少量已遭破壞的核苷的主要方法

4、，故作為修復基因的人8-羥基脫氧鳥嘌呤糖苷酶(human 8-hydroxyguanine glycosylase，hOGGl)基因和人MutT。同源物(1tlumanMutT homologue，hMTHl)基因亦越來越受到人們的重視，故本研究用人肺上皮細胞A549細胞作為研究對象，研究重鉻酸鉀的低劑量興奮效應對人肺上皮細胞A549細胞增殖的影響及其對hOGG1和hMTH1 mRNA的表達的影響，為以后的更深一步探討六價鉻致癌機制提供

5、試驗基礎。 材料和方法： 1．細胞選用人肺上皮細胞A549，刺激物為重鉻酸鉀，其作用濃度分別為0.15μmol/L，0.312μmol/L,0.625μmol/L，1,25μmol/L，2.5μmol/L，5μmol/L。對照組的重鉻酸鉀濃度為0μmol/L。 2．形態(tài)學觀察：以上各組在做噻唑蘭(MTT)比色法測細胞抑制率試驗之前，在倒置顯微鏡下觀察培養(yǎng)板內(nèi)細胞的生長狀況及形態(tài)學改變并且照相。 3． MT

6、I比色法測重鉻酸鉀刺激細胞后細胞的生長抑制率。 4．以．8-actin基因為參照，采用半定量RT-PCR技術檢測以上濃度的重鉻酸鉀作用細胞24h后hOGGl和hMTHl基因在mRNA水平上的表達。 5．統(tǒng)計學分析運用SAS9.0統(tǒng)計軟件進行分析，MTr結(jié)果各組之間的均數(shù)的比較以及兩種基因mRNA水平的表達結(jié)果的比較用單因素方差分析。檢驗水準α=0.05。結(jié)果1．對細胞增殖的影響濃度組為0.156μmol/L和0.312μ

7、mol/L的重鉻酸鉀能促進細胞的增殖，濃度組為0.625μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L和5.000μmol/L的重鉻酸鉀能抑制細胞的增殖，各組的生長抑制率與對照組比較差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。2．hOGGl和hMTI-11在mRNA上的表達結(jié)果濃度組為0.156＃mol/L和0.312μmol/L的重鉻酸鉀可促進hOGGl及hMTHlmRNA的表達，濃度組為0.625gmol/L、1.25kzmol/