EBV感染人胃上皮細(xì)胞對bcl-2基因表達(dá)狀況的影響.pdf

1、目的：觀察EBV感染各種人胃上皮細(xì)胞后對bcl-2基因表達(dá)狀況的影響，以及四種EBVⅠ型潛伏感染基因在其中所起作用，以分析EBVaGC形成中EBV，及其潛伏感染基因與細(xì)胞癌基因的相互作用。方法：EBV感染及pcDNA3轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，經(jīng)G418篩選出抗性細(xì)胞克隆，用EBV陽性人血清抗補(bǔ)體免疫熒光染色法篩選出100％細(xì)胞EBNA1陽性的克隆，隨機(jī)抽取各3個克隆，經(jīng)擴(kuò)增培養(yǎng)至對數(shù)生長期，以TRIzol法提取細(xì)胞總RNA，Oligo(dT)柱層

2、析法提取poly (A)+ RNA，取1.5 μg上樣進(jìn)行變性瓊脂糖凝膠電泳，真空轉(zhuǎn)移法轉(zhuǎn)移至尼龍膜，紫外線固定后，分別與[α-32P]dCTP以寡核苷酸引物法標(biāo)記的bcl-2和GAPDH cDNA探針雜交，放射自顯影圖象經(jīng)掃描輸入計算機(jī)，以Quantity One分析軟件進(jìn)行密度掃描測定。結(jié)果：1、4種人胃上皮細(xì)胞（CHI、 NU-GC-3、MKN 28、MKN74）中未檢測到bcl-2 mRNA 表達(dá)， EBV感染后增強(qiáng)8.5k