鈷離子對人腎小管上皮細(xì)胞毒性及Bax、Bcl-2基因表達(dá)變化的體外實驗研究.pdf

1、背景：
　　由于優(yōu)良的機(jī)械性能、耐磨損、制作簡單、價格合理等優(yōu)點，鈷基合金成為牙體牙列缺損、牙列缺失、頜骨缺損等疾病的常規(guī)修復(fù)材料。研究顯示，長期接觸物理、化學(xué)以及生物環(huán)境，鑄造合金在口內(nèi)容易發(fā)生電化學(xué)腐蝕，析出金屬離子。電化學(xué)腐蝕析出的金屬離子會接觸鄰近的細(xì)胞和組織，并通過血液循環(huán)分布到全身各處，患者易出現(xiàn)牙齦染色、牙齦炎、牙周炎、過敏等不良反應(yīng)。
　　鈷基合金腐蝕析出的離子以Co2+為主，Co2+是否對人體全身健康系統(tǒng)造

2、成損害，國內(nèi)外目前均未見明顯報道。體內(nèi)的Co2+絕大部分經(jīng)腎臟排泄，經(jīng)腎小球濾過后在腎小管被重吸收，因此Co2+更容易蓄積在腎小管上皮細(xì)胞。本研究以人腎小管上皮細(xì)胞為研究對象，采用MTT法和RT-PCR法聯(lián)合評價Co2+的腎細(xì)胞毒性，以期為臨床上鈷基合金修復(fù)體的選擇提供實驗依據(jù)。
　　目的：
　　1.研究鈷離子對人腎小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞毒性。
　　2.探討鈷離子對人腎小管上皮細(xì)胞凋亡基因Bax、Bcl-2表達(dá)變化的影響；

3、
　　3.評價鈷離子的生物安全性，初步探討鈷離子影響人腎小管上皮細(xì)胞生長的機(jī)制。
　　方法：
　　1.體外培養(yǎng)人腎小管上皮細(xì)胞（HK-2），以5種濃度（0μM、2.5μM、5.0μM、7.5μM、10μM）的Co2+培養(yǎng)液分別干預(yù)培養(yǎng)細(xì)胞12h、24h、48h。
　　2.使用倒置顯微鏡觀察各時間點、各濃度培養(yǎng)組細(xì)胞的生長狀態(tài)，記錄細(xì)胞的形態(tài)變化。
　　3.采用MTT比色法檢測各時間點、各濃度培養(yǎng)組細(xì)胞的吸光

4、度值，測定細(xì)胞的相對增殖率。
　　4.應(yīng)用RT-PCR法檢測各時間點、各濃度組細(xì)胞凋亡基因Bax以及Bcl-2mRNA的表達(dá)情況，探討Co2+對腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響。
　　5.采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對所得的實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析。
　　結(jié)果：
　　1.倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)：腎小管上皮細(xì)胞正常為卵圓或短梭形，似鋪路石樣排列較緊密，貼壁生長好。隨著Co2+作用濃度和時間的增加，細(xì)胞間隙增大、數(shù)量減少、

5、部分細(xì)胞形態(tài)呈長梭形；高濃度干預(yù)24h以上時，細(xì)胞所剩無幾、異型性生長、無完整細(xì)胞形態(tài)、懸浮細(xì)胞多、凋亡率高。
　　2. MTT法檢測結(jié)果顯示：與陰性對照組相比較，各實驗組的OD值表達(dá)差異顯著（P<0.05）。隨著Co2+作用濃度、時間地增加，細(xì)胞的吸光度值逐漸減小，細(xì)胞的增殖率逐漸下降。
　　3. RT-PCR法檢測結(jié)果顯示：①相同作用時間時：各組Bax mRNA的表達(dá)增高，差異顯著( P<0.05）。Bcl-2 mRNA

6、的表達(dá)降低，差異顯著( P<0.05）。②相同作用濃度時：各組Bax mRNA表達(dá)增高，差異不顯著（ P>0.05）。Bcl-2 mRNA的表達(dá)降低，差異顯著( P<0.05）。隨著Co2+作用濃度以及時間地逐漸增加，Bax mRNA的表達(dá)量上升，Bcl-2 mRNA的表達(dá)量下調(diào),兩者的比值Bax/Bcl-2逐漸增大，促進(jìn)了細(xì)胞凋亡地發(fā)生。
　　結(jié)論：
　　1.低濃度(<7.5μM）鈷離子在觀察時間內(nèi)（12h-48h）對人腎