自噬對碘對比劑致人腎小管上皮細胞毒性的作用.pdf

1、目的:
　　本實驗以碘海醇(200mg(Ⅰ)/ml)干預體外培養(yǎng)的人近端腎小管上皮細胞(HK-2)建立細胞損傷模型，觀察碘對比劑(iodinated contrastmedia，CM)致人腎小管上皮細胞損傷中的自噬現(xiàn)象，并初步探討自噬在CM致人腎小管上皮細胞損傷和凋亡中的作用。
　　方法:
　　1.碘海醇(200mg(Ⅰ)/ml)分別干預HK-2細胞3h，6h，建立細胞損傷模型。Westen Blot檢測自噬標志蛋白微

2、管相關蛋白1輕鏈3(LC3Ⅱ)、自噬相關蛋白Atg7的表達變化。干預6h后，LC3Ⅱ-FITC熒光共聚焦顯微鏡觀察LC3Ⅱ標記的自噬體形成，透射電鏡觀察細胞自噬體形成。
　　2.碘海醇(200mg(Ⅰ)/ml)干預HK-2細胞6h建立細胞損傷模型，應用自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine，3-MA）10mmol/l共處理細胞抑制自噬。同上采用Westen Blot檢測LC3Ⅱ、Atg7表達;細胞上清液乳酸脫氫酶

3、(LDH)檢測細胞損傷程度;AnnexinⅤ-FITC結合流式細胞計數(shù)檢測細胞凋亡比例。
　　結果:
　　1.碘海醇(200mg(Ⅰ)/ml)干預6h后，透射電鏡可觀察到HK-2細胞質內自噬體的增多，共聚焦顯微鏡下觀察到LC3Ⅱ標記的自噬體的形成。與正常對照組相比，碘海醇干預組HK-2細胞3h、6h自噬相關蛋白LC3Ⅱ、Atg7表達顯著上調(P＜0.05)，并呈時間依賴性。
　　2.3-MA可明顯抑制HK-2細胞自噬，

4、單純3-MA干預組與正常對照組相比，以及碘海醇+3-MA干預組與單純碘海醇干預組相比，自噬標志蛋白LC3Ⅱ以及Atg7表達均明顯下調(P＜0.05，P＜0.05)。同時，與單純碘海醇干預組相比，加用用3-MA抑制自噬后，細胞上清液LDH明顯升高(P＜0.05)，HK-2細胞凋亡率明顯增加(P＜0.05)。
　　結論:
　　1.碘對比劑（碘海醇，200mg(Ⅰ)/ml）呈時間依賴性誘導HK-2細胞發(fā)生自噬。
　　2.自噬