高鈣離子刺激人腎小管上皮細胞表達HMGB1和IL-6的體外研究.pdf

1、目的:
　　觀察不同濃度鈣離子刺激下人腎小管上皮細胞(HK-2)表達白介素-6（IL-6）和高遷移率族蛋白-1（HMGB1）的水平。
　　方法:
　　在體外培養(yǎng)HK-2。在DMEM-F12培養(yǎng)基中加入可溶的二水氯化鈣晶體(CaC12·2H20)，配成不同濃度氯化鈣溶液(2.5mM，5mM，10mM)作為藥物組，刺激HK-2細胞6小時。實驗分四個組:a.正常對照組（無血清DMEM-F12培養(yǎng)基）;b.鈣離子Ⅰ組（2.5

2、mM CaC12+DMEM-F12培養(yǎng)基）;c.鈣離子Ⅱ組（5 mM CaC12+DMEM-F12培養(yǎng)基）;d.鈣離子Ⅲ組（10 mM CaCl2+ DMEM-F12培養(yǎng)基）。共同孵育6小時后，分別采用CCK-8試劑法檢測細胞增殖情況，微板法測定各組細胞上清液中LDH活性，酶聯(lián)免疫吸附試驗(Elisa)檢測各組細胞上清液中白介素-6的含量，Western blot法檢測人腎小管上皮細胞中HMGB1的表達情況。
　　結果:
　

3、　CCK-8法在酶標儀（450nm處）測定a組、b組、c組、d組的OD值分別為1.111±0.063、1.020±0.048、0.981±0.076、0.856±0.075，其中b組、c組、d組OD值分別與a組OD值相比差異均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);d組OD值分別與b組、c組OD值相比差異均有顯著統(tǒng)計學意義(p＜0.01);而b組和c組相比無明顯統(tǒng)計學差異(p＞0.05)。微板法測定a組、b組、c組、d組細胞上清液中LDH活性分別

4、是（28.79±11.12）U/L、(50.93±11.72)U/L、(75.61±12.30) U/L、(211.32±10.40) U/L。經(jīng)統(tǒng)計學分析，b組、c組、d組分別與a組相比均具有統(tǒng)計學差異(p＜0.05);d組分別與b組、c組相比均有顯著統(tǒng)計學差異（p＜0.01）;b組和c組相比具有統(tǒng)計學差異(p＜0.05)。Elisa結果提示，白介素-6在a組、b組、c組、d組上清液白介素-6含量分別為(299.92±14.13)pg

5、/ml、(421.63±20.56)pg/ml、(439.23±14.95)pg/ml、(464.77±24.95)pg/ml。經(jīng)統(tǒng)計學分析，b組、c組、d組分別與a組（對照組）比較均具有顯著統(tǒng)計學差異(p＜0.01);d組與b組比較有統(tǒng)計學差異(p＜0.05);c組與d組、b組分別比較均無統(tǒng)計學差異（p＞0.05）。Western blot檢測發(fā)現(xiàn)，HMGB1蛋白在b、c、d組的相對表達量明顯高于a組，相比均具有統(tǒng)計學差異(p＜0.0