阿托伐他汀對(duì)IL-6誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)分泌的作用.pdf

1、 目的：研究IL-6對(duì)人近端腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)增殖、細(xì)胞外基質(zhì)分泌及促纖維化因子表達(dá)的影響,探討阿托伐他汀干預(yù) IL-6誘導(dǎo)的腎臟損傷的機(jī)制及阿托伐他汀抗纖維化的分子機(jī)制。方法：1、不同濃度的IL-6(0ng/ml、0.5ng/ml、5ng/ml、50ng/ml)體外誘導(dǎo)培養(yǎng)HK-2細(xì)胞24h、48h、72h,MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖,化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)其細(xì)胞培養(yǎng)上清液FN、Ⅳ型膠原,研究劑量、時(shí)間依賴作用。2、在上述實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,分為

2、空白對(duì)照組、IL-6(5ng/ml)組和IL-6(5ng/ml)+阿托伐他汀(10-5mol/l)組,培養(yǎng)48h,MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)細(xì)胞外基質(zhì)FN、Ⅳ型膠原,免疫組化染色檢測(cè)CTGF的表達(dá),PCR檢測(cè)CTGF、TGF-β1 mRNA表達(dá)和western-blot檢測(cè)CTGF、TGF-β1蛋白水平的表達(dá)。結(jié)果：1. MTT結(jié)果顯示隨著IL-6濃度(0ng/ml、0.5ng/ml、5ng/ml、50ng/ml)增加,細(xì)

3、胞增殖增加,隨著IL-6作用時(shí)間(24h、48h、72h)的延長(zhǎng),細(xì)胞增殖也逐漸增加。2. 細(xì)胞培養(yǎng)上清液檢測(cè)結(jié)果顯示,隨著 IL-6(0ng/ml、0.5ng/ml、5ng/ml、50ng/ml)濃度增加,FN和Ⅳ型膠原分泌逐漸增加,隨著IL-6作用時(shí)間(24h、48h、72h)的延長(zhǎng),FN和Ⅳ型膠原分泌逐漸增加。3. 細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí),IL-6(5ng/ml)組較對(duì)照組細(xì)胞外FN、Ⅳ型膠原分泌增加(P<0.05),IL-6(5ng/

4、ml)+阿托伐他汀(10-5mol/l)組較IL-6(5ng/ml)組細(xì)胞外FN、Ⅳ型膠原分泌明顯減少(P<0.05)。4. 免疫組化結(jié)果顯示,細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí),IL-6(5ng/ml)組細(xì)胞較對(duì)照組 CTGF 表達(dá)明顯增加(P<0.05),而 IL-6(5ng/ml)+阿托伐他汀(10-5mol/l)組細(xì)胞較IL-6(5ng/ml)組CTGF表達(dá)明顯減少(P<0.05)。5. PCR結(jié)果顯示：IL-6(5ng/ml)組細(xì)胞培養(yǎng)48h后

5、CTGF mRNA較對(duì)照組表達(dá)增強(qiáng),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而 IL-6(5ng/ml)+阿托伐他汀(10-5mol/l)組與IL-6(5ng/ml)組比較CTGF mRNA表達(dá)減弱,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。6. Western blot 蛋白定量結(jié)果顯示：IL-6 (5ng/ml)組細(xì)胞培養(yǎng)48h后CTGF和TGF-β1蛋白均較對(duì)照組表達(dá)增強(qiáng),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 均<0.05),而 IL-6(5ng/ml)加入阿托伐他

6、汀(10-5mol/l)與單純IL-6(5ng/ml)組比較CTGF和TGF-β1蛋白均表達(dá)明顯減弱,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05),這與PCR結(jié)果相似。結(jié)論：1. IL-6可誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)分泌增加,并呈時(shí)間劑量依賴性。2. 阿托伐他汀對(duì)IL-6誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)分泌具有抑制作用。3. IL-6通過(guò)TGF-β1、CTGF細(xì)胞因子表達(dá)上調(diào)而產(chǎn)生促進(jìn)細(xì)胞增殖和ECM分泌的作用。4. 阿托伐他