阿托伐他汀抑制無(wú)血清缺氧條件下碘海醇誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制.pdf

1、目的：
　　研究Drp1介導(dǎo)的線粒體分裂與ROS介導(dǎo)的氧化應(yīng)激在無(wú)血清缺氧條件下對(duì)比劑（CM）誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞凋亡中的作用及阿托伐他汀在此過(guò)程中的保護(hù)機(jī)制。
　　方法：
　　以人腎小管上皮細(xì)胞（HKC）為研究對(duì)象，進(jìn)行無(wú)血清缺氧培養(yǎng)，分別與不同濃度（10、20、40、80、100、120、150、200 mgI/ml）碘海醇孵育2 h；同一濃度碘海醇（120 mgI/ml）分別處理細(xì)胞1、2、4、6、8、12 h及

2、碘海醇（80 mgI/ml）分別處理細(xì)胞2、4、6、8、12 h；不同濃度碘海（10、20、40、80、120 mgI/ml）處理細(xì)胞2 h。不同濃度阿托伐他?。?0-10、10-9、10-8、10-7 mol/L）預(yù)先與細(xì)胞孵育24 h，同一濃度阿托伐他?。?0-7 mol/L）預(yù)先與細(xì)胞孵育（6、12、24、36 h），阿托伐他汀10-7mol/L、與陽(yáng)性對(duì)照組DPI（二聯(lián)苯碘）10-5mol/L及NAC（N-乙酰半胱氨酸）10-5

3、mol/L預(yù)先與細(xì)胞孵育24 h，三者分別再與碘海醇（120 mgI/ml）在無(wú)血清缺氧條件下共刺激2 h。采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力；TUNEL法觀察細(xì)胞凋亡數(shù)情況；采用化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞上清液中微量丙二醛（MDA）含量與熒光檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞的ROS產(chǎn)生情況；RT-PCR法檢測(cè)gp91phox、p22phox、Bax、Bcl-2及caspase-3等基因表達(dá)情況；Western-blot法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Drp1、Cyt

4、c、caspase-3等表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　與正常對(duì)照組比較，不同濃度碘海醇組細(xì)胞增殖能力均受到不同程度抑制，其中10～40 mg組抑制不明顯，而120、150、200 mgI/ml組，1、2、4、6、8、12 h組與HSF+CM組抑制最明顯（P﹤0.05）；而ATO、DPI與NAC預(yù)處理后細(xì)胞增殖能力增高（P﹤0.05）。TUNEL法檢測(cè)示與正常對(duì)照組比較，HSF組、HSF+CM組細(xì)胞凋亡數(shù)增加（P﹤0.05）；與

5、HSF+CM組比較，ATO、DPI與NAC凋亡數(shù)明顯減少（P﹤0.05）。檢測(cè)MDA與ROS產(chǎn)生量顯示，對(duì)比劑顯著增加細(xì)胞MDA與 ROS產(chǎn)生（P﹤0.05）；而ATO、DPI與NAC顯著降低MDA與ROS產(chǎn)生（P<0.05）。RT-PCR法檢測(cè)顯示：對(duì)比劑促使gp91phox、p22phox、Bax及caspase-3 mRNA表達(dá)上調(diào)，Bcl-2 mRNA表達(dá)下調(diào)；而ATO減少gp91phox、p22phox、Bax及caspase

6、-3 mRNA的表達(dá)，增加Bcl-2 mRNA的表達(dá)，呈濃度依賴(lài)性（P<0.05）。Western-blot法檢測(cè)示：對(duì)比劑呈濃度與時(shí)間依賴(lài)性促使Drp1表達(dá)（P<0.05）；ATO呈濃度與時(shí)間依賴(lài)性降低Drp1表達(dá)（P<0.05）。CM促使Bax、Drp1、Cytc、caspase-3表達(dá)上調(diào)（P<0.05），Bcl-2表達(dá)下調(diào)（P<0.05）；而ATO、DPI與NAC減少Bax、Drp1、Cytc、caspase-3的表達(dá)（P<0.