干細(xì)胞因子對人腎小管上皮細(xì)胞表型變化及TGF-β1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　通過觀測干細(xì)胞因子（stem cell factor，SCF）對人近端腎小管上皮細(xì)胞（HK-2）形態(tài)以及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor beta1，TGF-β1）和纖維粘連蛋白（fibronectin，F(xiàn)N）的表達(dá)水平的影響，探討SCF在腎間質(zhì)纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法：
　　體外

2、培養(yǎng)HK-2細(xì)胞并給予SCF刺激，按照SCF不同終濃度分為如下4組：對照組（0ng/mL）、10 ng/mL組、50 ng/mL組、100 ng/mL組，各組均培養(yǎng)24 h；按照SCF刺激時(shí)間不同分為5組（SCF終濃度均為50 ng/mL）：對照組（0 h）、6 h組、12 h組、24 h組、48 h組。相差顯微鏡下觀察SCF不同濃度及刺激不同時(shí)間對HK-2細(xì)胞形態(tài)的影響，采用Real-time PCR檢測各組α-SMA、TGF-β1、

3、FN mRNA表達(dá)水平，Western印跡法檢測各組α-SMA、TGF-β1、FN蛋白的表達(dá)水平，ELISA法檢測上清液中TGF-β1的含量，并分析比較其表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果：
　　(1)給予SCF刺激后，HK-2細(xì)胞開始發(fā)生形態(tài)學(xué)改變，隨著SCF濃度的增加和刺激時(shí)間的延長，細(xì)胞形態(tài)逐漸由圓形或類圓形拉長為梭形。
　　(2)PCR及Western檢測結(jié)果顯示：分別以10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng

4、/mL SCF刺激HK-2細(xì)胞24 h，與對照組相比，α-SMA、TGF-β1、FNmRNA及蛋白表達(dá)均增高，且隨著刺激濃度增加，各因子表達(dá)逐漸增高（P＜0.05）。此外，以終濃度為50 ng/mL SCF分別刺激HK-2細(xì)胞6 h、12 h、24 h、48 h，其α-SMA、TGF-β1、FN mRNA及蛋白表達(dá)均上調(diào)；與對照組相比，SCF刺激6 h后，上述各因子表達(dá)稍有上調(diào)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P＞0.05），至12 h時(shí)表達(dá)明