AngⅡ?qū)θ四I小管上皮細(xì)胞線粒體動力學(xué)蛋白Drp1及Mfn1表達(dá)影響.pdf

1、背景:糖尿病腎臟疾病(diabetic kidney disease，DKD)是糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥之一，是導(dǎo)致終末期腎臟疾病(end-stage renaldisease，ESRD)的最主要原因。在DKD的發(fā)病機(jī)制中，腎臟線粒體損傷成為近年研究熱點(diǎn)。已有研究表明，在高糖作用下，腎臟細(xì)胞線粒體動力學(xué)發(fā)生改變。Drp1和Mfn1是調(diào)控線粒體動力學(xué)的兩種重要蛋白。腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin-Angiotensin System，

2、RAS)在DKD發(fā)生和進(jìn)展中發(fā)揮十分重要作用，大量研究證明，血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ，AngⅡ)是RAS系統(tǒng)中關(guān)鍵效應(yīng)因子。目前，關(guān)于動力學(xué)蛋白Drp1及Mfn1在糖尿病腎臟疾病患者腎組織表達(dá)情況以及AngⅡ?qū)δI小管上皮細(xì)胞Drp1及Mfn1表達(dá)影響國內(nèi)外還尚未見報(bào)道。
　　 目的：
　　 觀察動力學(xué)蛋白Drp1和Mfn1在糖尿病患者腎臟組織的表達(dá)情況。研究AngⅡ?qū)θ私I小管上皮細(xì)胞(HK-2)Drp1

3、及Mfn1表達(dá)的影響。
　　 方法：
　　 1、隨機(jī)選取經(jīng)臨床和腎臟病理確診為糖尿病腎臟疾病患者(10例)及微小病變患者(7例)。采用PASM、PAS、 HE染色觀察腎臟普通病理改變;免疫組化檢測腎臟組織Drp1和Mfn1表達(dá)變化。采用Pearson相關(guān)分析檢測Drp1、Mfn1與蛋白尿、肌酐相關(guān)性。
　　 2、常規(guī)培養(yǎng)HK-2細(xì)胞，以不同濃度AngⅡ刺激24小時(shí)，RealTime PCR及Western Blo

4、t分別從基因及蛋白水平檢測AngⅡ?qū)K-2細(xì)胞Drp1和Mfn1表達(dá)的影響。以高濃度AngⅡ刺激HK-2細(xì)胞，RealTime PCR及Western Blot檢測不同時(shí)間點(diǎn)Drp1及Mfn1水平的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、糖尿病腎臟疾病患者腎組織病理改變:HE和PAS，PASM染色顯示，與對照組患者腎臟組織比較，糖尿病腎臟疾病患者腎小球系膜中-重度增生，多個(gè)節(jié)段呈結(jié)節(jié)狀硬化，基底膜增厚僵硬，部分腎小管代償性擴(kuò)張

5、，可見上皮細(xì)胞脫落。
　　 2、糖尿病腎臟疾病患者腎組織Drp1、Mfn1表達(dá):免疫組化顯示:糖尿病腎臟疾病患者腎小管上皮細(xì)胞有明顯Drp1及Mfn1表達(dá)，且Drp1表達(dá)上調(diào)，而Mfn1表達(dá)下調(diào)(P＜0.05); Drp1與蛋白尿、肌酐呈正相關(guān)，Mfn1與蛋白尿、肌酐呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。
　　 3、AngⅡ誘導(dǎo)人近曲腎小管上皮細(xì)胞Drp1、Mfn1表達(dá)影響:在不同濃度(10-14μM-10-6μM) AngⅡ的刺激

6、下，Drp1 mRNA及蛋白表達(dá)較對照組相比明顯增加，且呈劑量和時(shí)間依賴性(P＜0.01)，Mfn1mRNA及蛋白表達(dá)明顯降低，且呈劑量和時(shí)間依賴性(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1、糖尿病腎臟疾病患者腎臟組織Drp1、Mfn1表達(dá)異常，表現(xiàn)為Drp1表達(dá)上調(diào)，Mfn1表達(dá)下調(diào);Drp1表達(dá)與患者蛋白尿，肌酐存在正相關(guān)，Mfn1表達(dá)與患者蛋白尿、肌酐存在負(fù)相關(guān)。
　　 2、外源性血管緊張素Ⅱ可誘導(dǎo)人近曲腎