HBx基因?qū)NA修復酶hOGG1，hMYHα及hMTH1表達的影響及其在L02細胞惡性轉(zhuǎn)化中的作用.pdf

1、目的:
　　 1.構建穩(wěn)定表達HBx的轉(zhuǎn)基因細胞模型L02/HBx，觀察L02/HBx細胞的惡性轉(zhuǎn)化。
　　 2.檢測L02/HBx中具有致突變作用的DNA氧化損傷產(chǎn)物8-OHdG的含量，同時觀察修復8-OHdG的主要DNA修復酶hOGG1，hMYHα和hMTH1 mRNA表達的改變，從DNA修復酶這一新的角度探討HBx在肝細胞癌發(fā)生機制中的作用。
　　 方法:
　　 1.傳代培養(yǎng)由課題組林松挺前期

2、構建的穩(wěn)定表達HBx的轉(zhuǎn)基因細胞模型L02/HBx及對照組L02和空載體對照組L02/pcDNA3.1細胞，軟瓊脂克隆形成實驗觀察L02/HBx細胞的惡性轉(zhuǎn)化。
　　 2.采用高效液相色譜儀并電化學檢測器(HPLC/ECD)測定轉(zhuǎn)基因細胞株L02/HBx及對照組細胞L02和L02/pcDNA3.1中DNA氧化損傷產(chǎn)物8-OHdG的含量。
　　 3.進一步應用RT-實時PCR定量檢測DNA修復酶hOGG1，hMYHαh

3、MTH1 mRNA在L02/HBx，L02/pcDNA3.1和L02細胞中的表達。
　　 結果:
　　 1.軟瓊脂克隆形成試驗發(fā)現(xiàn)HBx的轉(zhuǎn)基因細胞L02/HBx的克隆形成率(9.80％±0.5[％]，p<0.05)明顯高于L02和L02/pcDNA3.1細胞(P<0.05)。
　　 2.應用HPLC-ECD測定各組細胞中8-OHdG的含量，結果表明與對照組細胞相比，L02/HBx細胞中8-OHdG的含量(7

4、.26±1.94，p<0.05)顯著升高，而對照組L02/pcDNA3.1與L02細胞中8-OHdG的濃度無明顯差異。
　　 3.RT/實時PCR定量檢測發(fā)現(xiàn)DNA修復酶hMTH1在L02/HBx(2.15±0.7463)細胞中的表達顯著高于L02(0.0924±0.0602)和L02/pDNA3.1(0.0813±0.0161)細胞(p<0.05)，相反DNA修復酶hMYHα在L02/HBx(0.0313±0.0131)細胞

5、中的表達卻明顯低于L02(0.7112±0.0296)和L02/pDNA3.1(0.4042±0.2811)細胞(p<0.05)，而DNA修復酶hOGG1 mRNA在各組細胞中的表達無顯著差異(p>0.05)。
　　 結論:
　　 HBx可以通過誘導氧化應激，加劇DNA氧化損傷，引起具有致癌作用的DNA氧化損傷產(chǎn)物8-OHdG蓄積，使得DNA修復酶hMTH1表達反應性的上升。HBx同時下調(diào)DNA修復酶hMYHα的表達，從