HBx對肝細(xì)胞HMGB1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:構(gòu)建表達(dá)HBx的HBx-pcDNA3.1質(zhì)粒，觀察HBX對HMGB1的表達(dá)的影響;并篩選出能有效抑制HMGB1表達(dá)的小干擾RNA，為探索HBX、HMGB1的相互關(guān)系奠定實驗基礎(chǔ)。
　　方法:從HepG22.15細(xì)胞擴(kuò)增出野生型HBX基因片段并連接到pcDNA3.1載體質(zhì)粒，將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到兩種不同的肝細(xì)胞株（HepG2、LO2細(xì)胞），用G418篩選穩(wěn)定表達(dá)HBx的細(xì)胞，觀察瞬時轉(zhuǎn)染48小時后及穩(wěn)定表達(dá)HBx的細(xì)胞系中HMGB1的

2、蛋白表達(dá)水平。用Lipo2000脂質(zhì)體將三種下調(diào)HMGB1表達(dá)的小干擾RNA(si-RNA)轉(zhuǎn)入HepG22.15細(xì)胞，篩選出干擾HMGB1表達(dá)最有效的一種，為進(jìn)一步研究做準(zhǔn)備。
　　結(jié)果:HBX基因瞬時轉(zhuǎn)染48小時后，HepG2及LO2細(xì)胞中HMGB1表達(dá)均明顯上升;穩(wěn)定細(xì)胞系HepG2-HBx建系一個月后，HMGB1表達(dá)水平仍較陰性質(zhì)粒對照組高;穩(wěn)定細(xì)胞系LO2-HBx建系若干年后，HMGB1表達(dá)水平較空白質(zhì)粒對照組表達(dá)下調(diào)。