黃曲霉毒素B1轉(zhuǎn)化L02細(xì)胞差異基因表達(dá)譜的研究.pdf

1、目的：分析miRNA 在惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的表達(dá)差異，利用GINI 技術(shù)和基因芯片技術(shù)，初步篩選黃曲霉毒素作用L02細(xì)胞的基因靶點(diǎn)。
　　 方法：首先通過(guò)RT-PCR 技術(shù)確定L02細(xì)胞內(nèi)含有黃曲霉毒素B1的代謝活化酶CYP1A2，然后以黃曲霉毒素AFB1（終濃度1 μg/ml）作用正常生長(zhǎng)的L02細(xì)胞一周，用軟瓊脂克隆實(shí)驗(yàn)證實(shí)細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，具有惡性細(xì)胞的特性。通過(guò)miRNA基因芯片技術(shù)檢測(cè)正常L02細(xì)胞和AFB1轉(zhuǎn)化細(xì)胞中

2、miRNA的基因表達(dá)差異。再根據(jù)GINI 技術(shù)的原理，用emetine 阻斷轉(zhuǎn)化細(xì)胞內(nèi)自我修復(fù)途徑——無(wú)意義介導(dǎo)的衰變(nonsense-mediated decay，NMD)，利用基因芯片技術(shù)比較加入emetine和未加入emetine的L02+AFB1細(xì)胞表達(dá)有差異的基因，在上調(diào)的基因中初步篩選AFB1可能作用的靶基因。
　　 結(jié)果：RT-PCR結(jié)果顯示L02細(xì)胞中有CYP1A2表達(dá)。miRNA 芯片分析顯示主要的上調(diào)基因?yàn)?/p>

3、has-miR-671-5p，下調(diào)基因?yàn)閔as-miR-96，他們都與蛋白合成、免疫系統(tǒng)、細(xì)胞生理功能密切相關(guān)，其中和腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)的靶mRNA和蛋白是IGF2，鋅指蛋白和早期未成熟密碼子。通過(guò)emitine 抑制NMD 途徑，在上調(diào)基因中發(fā)現(xiàn)TSC1基因、EphA2基因與癌癥發(fā)生密切相關(guān)。
　　 結(jié)論：黃曲霉毒素B1誘導(dǎo)人胚肝細(xì)胞L02發(fā)生了惡性轉(zhuǎn)化，其實(shí)基因表達(dá)譜產(chǎn)生差異。microRNA作用的靶基因與多種蛋白合成、免疫