子癇前期外周血CD3-CD16+CD56+NK細胞水平變化研究.pdf

1、目的：
　　 子癇前期（preeclampsia）是嚴重威脅母兒健康的妊娠期特有疾病，是導致孕產婦和圍產兒死亡的主要原因之一。由于其發(fā)病機制至今尚不明確，嚴重影響了有效防治。近幾年來由于分子免疫學的飛速發(fā)展，子癇前期被認為與炎癥、血管內皮功能障礙，母胎間的免疫不耐受密切相關，從而引起免疫損傷、滋養(yǎng)細胞缺血及胎盤植入異常，引起全身不同程度的血管內皮損傷和嚴重的全身性炎癥反應，彌漫性內皮細胞損傷被認為是子癇前期發(fā)病的中心環(huán)節(jié)。

2、>　　 自然殺傷細胞（natural-killer cell，NK）不依賴于抗原刺激，能自發(fā)地溶解多種腫瘤細胞和被病毒感染細胞，稱為自然殺傷細胞，主要存在于外周血和脾臟中，在人外周血中占淋巴細胞的5％-15％，是機體重要的免疫細胞。人類NK細胞組的分化抗原有CD16，CD56，CD57，CD69，CD94，CD96等，其中具有代表性的表型為CD3-CD56+CD16+。
　　 本試驗將應用流式細胞分析技術，檢測晚孕子癇前期婦女

3、外周血NK細胞CD3-CD16+CD56+變化，并與同期正常晚期妊娠婦女，健康育齡未孕婦女為對照。初步探討NK細胞在子癇前期發(fā)病中的變化，以期探討子癇前期的發(fā)病機制，從而為尋找防治措施提供新的思路。
　　 方法：
　　 一、標本來源
　　 選取2010年1月至2010年3月在盛京醫(yī)院產科住院的孕婦為研究對象。子癇前期患者27例，年齡26.3±1.8歲，孕周為36.2±1.5周，其中輕度子癇前期者8例，重度子癇前期

4、者19例。子癇前期的診斷標準依據(jù)樂杰主編全國統(tǒng)編本科教材《婦產科學》第七版的診斷及分類標準。正常晚孕婦女15例為對照組，年齡28.3±1.5歲，孕周為36.4±1.3周。同時選擇健康育齡未孕婦女15例作為對照組，年齡為24.9±1.6歲。以上兩組妊娠組均為單胎妊娠，既往無特殊疾病史，無其他妊娠合并癥，未服用免疫抑制或增強藥物，組間一般情況比較無差異性。
　　 二、流式法檢測NK細胞
　　 各組婦女空腹采取肘靜脈血3ml，

5、每份標本設兩個試管，實驗管及陰性對照管。每份標本各取50μl抗凝全血分別加入2個試管中，依次在實驗管中加入抗CD3-FITC/CD16CD56-PE 15μl。加樣完畢后，震蕩混勻，避光靜置15分鐘。加入溶血劑450μl，震蕩混勻，避光靜置15分鐘。各試管中依次加入1m1PBS，放入自動平衡離心機中，15℃轉速設定1500轉/分鐘，離心5分鐘。待離心完畢，快速傾倒上清，并且管口朝下，用衛(wèi)生紙將管口的殘留液體吸干，僅保留管底的沉淀物。各試

6、管中依次加入溶血素400μl，吹打重懸，上機檢測。
　　 結果：
　　 子癇前期組母血CD3-CD16+CD56+NK細胞所占比例為15.51％±2.49％，明顯高于正常晚孕組9.97％±1.41％和健康育齡未孕組11.11％±1.48％，有顯著性差異（P均<0.01）。正常晚孕組母血CD3-CD16+CD56+NK細胞百分比低于健康育齡未孕組，但差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。
　　 結論：
　　 子