癲癇患兒外周血中CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞的變化及意義.pdf

1、目的：
　　 癲癇(EP)是由多種病因引起的臨床常見疾病,隨著神經(jīng)解剖、電生理生化及遺傳等學科的發(fā)展,越來越多的人認為自身免疫機制可能在癲癇發(fā)病中起到一定作用。調(diào)節(jié)性T(Treg)細胞是抑制性T細胞的一種功能亞群,通過抑制其他免疫效應細胞的功能發(fā)揮免疫抑制活性,調(diào)節(jié)機體免疫反應,它與白細胞介素-2(IL-2)關系非常密切。癲癇患兒體內(nèi)存在IL-2濃度的異常,推測癲癇患兒外周血中Treg細胞也可能存在異常。本文研究CD4+CD25

2、+Foxp3+Treg細胞在癲癇患兒外周血中的表達水平,探討其在癲癇發(fā)病機制中的作用。
　　 材料和方法：
　　 一研究對象
　　 (一)實驗組
　　 2010年3月至2010年12月在我院小兒神經(jīng)內(nèi)科病房住院或門診就診的患兒。根據(jù)入選標準和剔除標準入選的患兒共41例,分兩組:A組(年齡＞1歲)29例,其中男16例,女13例,平均5.59±2.61歲;B組(年齡1月～1歲)12例,其中男8例,女4例,平均

3、0.39±0.19歲。根據(jù)1989年國際抗癲癇聯(lián)盟(ILAE)制定的癲癇發(fā)作的分類方案,全部病例均為強直-陣攣發(fā)作。
　　 (二)正常對照組
　　 同期門診體檢的健康兒童38例,分兩組:C組(年齡＞1歲)30例,其中男20例,女10例,年齡3.54±2.65歲;D組(年齡1月～1歲)8例,其中男4例,女4例,年齡0.48±0.38歲。癲癇組與對照組問性別、年齡無統(tǒng)計學差異。
　　 二、標本采集
　　 癲癇

4、組患兒于入院24小時內(nèi)取空腹靜脈血2ml,對照組健康兒童取空腹靜脈血2ml,經(jīng)肝素抗凝后待用。
　　 三、主要儀器和試劑
　　 FACSCalibur流式細胞儀、高溫低速離心機、震蕩儀、加樣槍、超凈工作臺;人調(diào)節(jié)性T細胞染色試劑盒(eBioscience公司)、溶血素、淋巴細胞分離液。
　　 四、方法
　　 (一)Treg細胞比例的測定
　　 (1)外周血單核細胞(PBMCs)的提取
　　

5、 (2)T調(diào)節(jié)細胞的染色
　　 (3)上流式細胞儀分析
　　 (二)淋巴細胞亞群及免疫球蛋白的測定
　　 按照說明書,用流式細胞術測定淋巴細胞亞群,用免疫速率散射比濁法測定免疫球蛋白。
　　 實驗結果：
　　 1、與對照組相比,年齡＞1歲的癲癇組外周血中Treg細胞比例、CD4+T細胞比例、CD4+/CD8+比值、免疫球蛋白A濃度顯著降低,CD8+T細胞比例、自然殺傷(NK)細胞比例、B淋巴細胞比

6、例顯著升高。
　　 2、與對照組相比,年齡1月～1歲的癲癇組外周血中Treg細胞比例、CD4+/CD8+比值、免疫球蛋白A濃度顯著降低,CD8+T細胞比例升高。
　　 3、1月～1歲組患兒外周血中免疫球蛋白A濃度、免疫球蛋白G濃度較＞1歲組顯著降低,其余免疫指標兩組間比較差異無統(tǒng)計學差異。
　　 結論：
　　 1、癲癇患兒外周血CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞比例顯著降低,免疫抑制活性減弱,使C