亞砷酸聯(lián)合順鉑抑制人鼻咽癌裸鼠移植瘤生長及p16去甲基化的研究.pdf

1、目的:
　　本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用亞砷酸、順鉑及亞砷酸聯(lián)合順鉑作用于人鼻咽癌CNE-2Z裸鼠移植瘤模型，探討亞砷酸、順鉑、亞砷酸聯(lián)合順鉑抑制人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生長及其機(jī)制，揭示抑癌基因p16在鼻咽癌中失表達(dá)的可能機(jī)理，探討抑癌基因p16的去甲基化治療，闡明該基因與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性，為臨床應(yīng)用亞砷酸聯(lián)合順鉑治療鼻咽癌提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　方法:
　　選擇適齡BALB/c裸鼠40只，建立人鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞裸鼠移植瘤模型

2、，隨機(jī)分為空白對(duì)照組(Control)、亞砷酸組(As2O3)、順鉑組(DDP)及聯(lián)合組(As2O3+DDP)四組，藥物處理后處死裸鼠，取出移植瘤。觀察移植瘤生長情況，繪制移植瘤生長趨勢曲線，計(jì)算抑瘤率，分別比較各組移植瘤重量及體積;采用HRM法檢測各組移植瘤p16啟動(dòng)子區(qū)甲基化率;采用Real-Time RT-PCR法檢測各組移植瘤組織中p16 mRNA表達(dá);采用免疫組化SP法檢測各組移植瘤組織中p16蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:

3、r>　　1.裸鼠移植瘤模型建立情況:接種細(xì)胞懸液后第6天所有裸鼠移植瘤直徑均達(dá)0.5cm，成瘤率為100％，實(shí)驗(yàn)期間裸鼠無死亡。
　　2.裸鼠移植瘤的抑制情況:藥物處理后，相對(duì)Control組，As2O3組、DDP組與As2O3+DDP組移植瘤生長趨勢放緩，以As2O3+DDP組最為顯著;As2O3組、DDP組與As2O3+DDP組移植瘤重量明顯較輕(P＜0.05)，體積也明顯變?。≒＜0.05）;As2O3組、DDP組和As2O

4、3+DDP組抑瘤率分別為25.40％、35.45％、59.26％，且以As2O3+DDP組效果最為顯著。
　　3.HRM法檢測p16甲基化率:與Control組相比，As2O3組移植瘤甲基化率略低（P＞0.05）;DDP組、As2O3+DDP組移植瘤甲基化率顯著降低（P＜0.05）。與As2O3組相比，DDP組、As2O3+DDP組移植瘤甲基化率顯著降低(P＜0.05)。與DDP組相比，As2O3+DDP組移植瘤甲基化率略低(P＞

5、0.05)。
　　4.Real-Time RT-PCR檢測p16 mRNA表達(dá):與Control組相比，As2O3組、DDP組與As2O3+DDP組移植瘤p16基因mRNA表達(dá)量顯著升高(P＜0.05)。與As2O3組相比，DDP組移植瘤p16基因rnRNA表達(dá)量較低（P＜0.05），As2O3+DDP組移植瘤p16基因mRNA表達(dá)量顯著升高(P＜0.05)。與DDP組相比As2O3+DDP組移植瘤p16基因mRNA表達(dá)量顯著升高

6、（P＜0.05）。
　　5.免疫組化SP法檢測蛋白表達(dá):與Control組相比，As2O3組、DDP組、As2O3+DDP組移植瘤p16蛋白表達(dá)量顯著較高（P＜0.05）。與As2O3組相比，DDP組移植瘤p16蛋白表達(dá)量相近（P＞0.05），As2O3+DDP組移植瘤p16蛋白表達(dá)量顯著升高（P＜0.05）。與DDP組相比，As2O3+DDP組移植瘤p16蛋白的表達(dá)顯著升高（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　As2O