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文檔簡介
1、目的:
本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用亞砷酸、順鉑及亞砷酸聯(lián)合順鉑作用于人鼻咽癌CNE-2Z裸鼠移植瘤模型,探討亞砷酸、順鉑、亞砷酸聯(lián)合順鉑抑制人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生長及其機(jī)制,揭示抑癌基因p16在鼻咽癌中失表達(dá)的可能機(jī)理,探討抑癌基因p16的去甲基化治療,闡明該基因與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性,為臨床應(yīng)用亞砷酸聯(lián)合順鉑治療鼻咽癌提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
方法:
選擇適齡BALB/c裸鼠40只,建立人鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞裸鼠移植瘤模型
2、,隨機(jī)分為空白對(duì)照組(Control)、亞砷酸組(As2O3)、順鉑組(DDP)及聯(lián)合組(As2O3+DDP)四組,藥物處理后處死裸鼠,取出移植瘤。觀察移植瘤生長情況,繪制移植瘤生長趨勢曲線,計(jì)算抑瘤率,分別比較各組移植瘤重量及體積;采用HRM法檢測各組移植瘤p16啟動(dòng)子區(qū)甲基化率;采用Real-Time RT-PCR法檢測各組移植瘤組織中p16 mRNA表達(dá);采用免疫組化SP法檢測各組移植瘤組織中p16蛋白表達(dá)。
結(jié)果:
3、r> 1.裸鼠移植瘤模型建立情況:接種細(xì)胞懸液后第6天所有裸鼠移植瘤直徑均達(dá)0.5cm,成瘤率為100%,實(shí)驗(yàn)期間裸鼠無死亡。
2.裸鼠移植瘤的抑制情況:藥物處理后,相對(duì)Control組,As2O3組、DDP組與As2O3+DDP組移植瘤生長趨勢放緩,以As2O3+DDP組最為顯著;As2O3組、DDP組與As2O3+DDP組移植瘤重量明顯較輕(P<0.05),體積也明顯變?。≒<0.05);As2O3組、DDP組和As2O
4、3+DDP組抑瘤率分別為25.40%、35.45%、59.26%,且以As2O3+DDP組效果最為顯著。
3.HRM法檢測p16甲基化率:與Control組相比,As2O3組移植瘤甲基化率略低(P>0.05);DDP組、As2O3+DDP組移植瘤甲基化率顯著降低(P<0.05)。與As2O3組相比,DDP組、As2O3+DDP組移植瘤甲基化率顯著降低(P<0.05)。與DDP組相比,As2O3+DDP組移植瘤甲基化率略低(P>
5、0.05)。
4.Real-Time RT-PCR檢測p16 mRNA表達(dá):與Control組相比,As2O3組、DDP組與As2O3+DDP組移植瘤p16基因mRNA表達(dá)量顯著升高(P<0.05)。與As2O3組相比,DDP組移植瘤p16基因rnRNA表達(dá)量較低(P<0.05),As2O3+DDP組移植瘤p16基因mRNA表達(dá)量顯著升高(P<0.05)。與DDP組相比As2O3+DDP組移植瘤p16基因mRNA表達(dá)量顯著升高
6、(P<0.05)。
5.免疫組化SP法檢測蛋白表達(dá):與Control組相比,As2O3組、DDP組、As2O3+DDP組移植瘤p16蛋白表達(dá)量顯著較高(P<0.05)。與As2O3組相比,DDP組移植瘤p16蛋白表達(dá)量相近(P>0.05),As2O3+DDP組移植瘤p16蛋白表達(dá)量顯著升高(P<0.05)。與DDP組相比,As2O3+DDP組移植瘤p16蛋白的表達(dá)顯著升高(P<0.05)。
結(jié)論:
As2O
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