雌激素聯(lián)合順鉑治療人卵巢癌細(xì)胞裸鼠移植瘤組織中Survivin mRNA的檢測(cè)及意義.pdf

1、目的：探求凋亡抑制因子Survivin mRNA在雌激素聯(lián)合順鉑治療人卵巢癌細(xì)胞裸鼠移植瘤組織中的表達(dá)情況，分析雌激素聯(lián)合順鉑治療卵巢癌裸鼠移植瘤后Survivin的表達(dá)及其與細(xì)胞凋亡、血管生成的相關(guān)性，探討雌激素在卵巢癌患者及術(shù)后應(yīng)用的可行性。
　　 方法：⑴于液氮中取出卵巢癌細(xì)胞株HO-8910，傳統(tǒng)方法復(fù)蘇后，接種于RPMI-1640培養(yǎng)液(含10％去雌激素的胎牛血清)中，在細(xì)胞培養(yǎng)箱(條件為37℃、5％二氧化碳飽和濕度)

2、中培養(yǎng)。仔細(xì)觀察卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)消化傳代，一般約為3天左右。⑵30只4周齡，體重約14～16克的雌性BALB/c裸鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)于泰山醫(yī)學(xué)院SPF級(jí)別實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的單層癌細(xì)胞，經(jīng)酶消化處理后，配成濃度為1×107ml的單細(xì)胞懸液，消毒后于裸鼠背側(cè)近后肢處皮下注射接種，每只0.2ml。⑶癌細(xì)胞接種后，當(dāng)瘤子長(zhǎng)至大小似粟粒時(shí)，用剪耳做標(biāo)記的方法隨機(jī)的將裸鼠分為不同用藥的6組，每一組有裸鼠5只。

3、藥物濃度及具體分組如下：A組(對(duì)照組)：0.2ml生理鹽水；B組(低劑量17β-E2組)：0.2ml劑量為1.3μg/d17β-E2；C組(高劑量17β-E2組)：0.2ml劑量為3.9μg/d17β-E2；D組(順鉑組)：0.2ml濃度為5mg/kg的順鉑；E組(順鉑+17β-E2)：0.2ml濃度為5mg/kg的順鉑+1.3μg/d17β-E2；F組(順鉑+17β-E2組)：0.2ml濃度為5mg/kg的順鉑+3.9μg/d17β-

4、E2。⑷脫臼法處死裸鼠后，完整取出瘤體，采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)17β-E2單獨(dú)使用或者聯(lián)合順鉑用于卵巢癌細(xì)胞裸鼠移植瘤組織中Survivin mRNA的表達(dá)。⑸利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)人卵巢癌裸鼠移植瘤組織的細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的情況。⑹免疫組化SP法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組裸鼠皮下移植瘤中VEGF、CD34的表達(dá)。
　　 結(jié)果：①A組、B組、C組、D組、E組、F組裸鼠移植瘤組織中Survivin mRNA的表達(dá)相對(duì)量分別是1.000

5、、0.429±0.014、0.210±0.018、0.090±0.007、0.045±0.004、0.021±0.001，各實(shí)驗(yàn)用藥組與對(duì)照組相比，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。17β-E2+順鉑聯(lián)合用藥組和單獨(dú)順鉑用藥組相比，裸鼠移植瘤組織中Survivin mRNA的表達(dá)均降低，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②細(xì)胞周期：各治療組細(xì)胞周期G0/G1期細(xì)胞逐漸減少，S期細(xì)胞明顯增多，說(shuō)明可能將細(xì)胞主要阻滯于S期。③凋亡情況：各用藥組

6、凋亡率較對(duì)照組凋亡率均升高，低劑量17β-E2與生理鹽水組凋亡率相比，p>0.05，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明生理鹽水組、低劑量17β-E2的凋亡率沒(méi)有顯著差別。C組、D組、E組、F組與A組比較，p<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各用藥組細(xì)胞凋亡中以晚期凋亡居多。④免疫組織化學(xué)法檢測(cè)VEGF蛋白含量，CD34計(jì)數(shù)，對(duì)于每個(gè)指標(biāo)免疫組織化學(xué)評(píng)分，各處理組和對(duì)照組相比，E組、F組和單用藥組相比，p<0.05，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑤人卵巢癌細(xì)胞裸

7、鼠移植瘤組織中Survivin mRNA的表達(dá)與細(xì)胞凋亡、VEGF及MVD的關(guān)系，經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析，提示Survivin mRNA的表達(dá)與細(xì)胞凋亡、VEGF、MVD均呈高度正相關(guān)。
　　 結(jié)論：⑴實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)可以敏感且特異性地檢測(cè)出凋亡抑制因子Survi-vin mRNA在人卵巢癌細(xì)胞裸鼠移植瘤組織中的表達(dá)，且方法準(zhǔn)確可靠，操作方便。⑵17β-E2單用或聯(lián)合順鉑應(yīng)用于裸鼠，能降低各實(shí)驗(yàn)組裸鼠移植瘤組