人卵巢癌細(xì)胞裸鼠移植瘤多藥耐藥模型的建立.pdf

1、目的：傳統(tǒng)的MDR顯型的內(nèi)在機(jī)制是細(xì)胞過度表達(dá)MDRl基因編碼的170-kDa的跨膜糖蛋白(P-gp)，MDRl基因?qū)儆贏BC(ATP-bindingCassette)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族的一員，其過度表達(dá)在體外實(shí)驗(yàn)中顯示對廣譜化療藥物的耐藥。因此急需發(fā)展一種高效低毒的方法來逆轉(zhuǎn)P-gp介導(dǎo)的多藥耐藥，目前國內(nèi)研究P-gp介導(dǎo)耐藥的合適體內(nèi)模型還很少，限制了多藥耐藥的研究。本實(shí)驗(yàn)旨在建立人卵巢癌裸鼠荷瘤多藥耐藥模型，并探討其生物學(xué)特性。

2、 方法：將BALB/C/nu/nu裸鼠隨機(jī)分為二大組：體外誘導(dǎo)組和體內(nèi)誘導(dǎo)組。體外誘導(dǎo)組分為耐藥株組(組Ⅰ)和敏感株組(組Ⅱ)。體內(nèi)誘導(dǎo)組分為：誘導(dǎo)組(組Ⅲ)和對照組(組Ⅳ)，每組20只。組Ⅰ：皮下移植人卵巢癌耐藥細(xì)胞株OVCAR/AR：組Ⅱ：皮下移植人卵巢癌細(xì)胞株OVCAR-3。待腫瘤體積達(dá)100mm3時(shí)，以上兩組行尾靜脈注射化療藥物，化療21天后處死裸鼠。組Ⅲ、組Ⅳ：皮下移植人卵巢癌敏感細(xì)胞株OVCAR-3，待腫瘤體積達(dá)100mm3

3、時(shí)，組Ⅲ反復(fù)瘤周注射小劑量阿霉素(ADM)誘導(dǎo)腫瘤耐藥，組Ⅳ采用同等體積生理鹽水同步注射作為對照，誘導(dǎo)8周后處死裸鼠。觀察各組腫瘤模型的成瘤率和生長率，采用RT-PCR檢測腫瘤內(nèi)MDRl mRNA的表達(dá)水平，免疫組織化學(xué)染色檢測腫瘤細(xì)胞P-糖蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果：四組裸鼠成瘤率均為100﹪，病理學(xué)檢查提示人卵巢癌細(xì)胞裸鼠移植瘤具有人卵巢癌組織學(xué)特征?；熎诮MⅠ腫瘤重量和生長率均明顯高于組Ⅱ，差異有顯著性；組Ⅰ MDRl mRN

4、A及P-gp蛋白表達(dá)水平均明顯高于組Ⅱ，結(jié)果分別為(56.2±5.8)﹪和(2.4±0.2)﹪，(29.1±2.2)﹪和(2.2±0.1) ﹪，差異有顯著性。體內(nèi)誘導(dǎo)期組Ⅳ腫瘤體積明顯高于組Ⅲ，差異有顯著性；組ⅢMDR1 mRNA及P-gp蛋白表達(dá)水平均明顯高于組Ⅳ，結(jié)果分別為(42.3±6.4)﹪和(2.5±0.3)﹪，(21.8±2.6)﹪和(2.4±0.3)﹪差異有顯著性。 結(jié)論：直接移植人卵巢癌細(xì)胞株OVCAR-3的耐藥