IL-17D基因?qū)θ寺殉舶┞闶笠浦擦錾L的影響.pdf

1、目的:
　　將轉(zhuǎn)染IL-17D基因的人上皮性卵巢癌細(xì)胞株種植于裸鼠皮下，觀測IL-17D對裸鼠皮下移植瘤生長的影響;通過檢測裸鼠體內(nèi)MHCI類鏈相關(guān)蛋白A(MHC class(I)-related protein A，MICA)分子表達(dá)的變化，初步探討IL-17D促瘤作剛的相關(guān)因素，為研究上皮性卵巢癌的免疫逃逸、耐藥及診療提供新的線索。
　　方法:
　　1體外培養(yǎng)轉(zhuǎn)染IL-17D的人上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3細(xì)胞(SK

2、OV3/17D)、OVCAR3細(xì)胞(OVCAR3/17D)，各自對應(yīng)的空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的SKOV3/neo細(xì)胞、OVCAR3/neo細(xì)胞(Fig.1)，37℃，5％ CO2的恒溫培養(yǎng)箱中連續(xù)傳代培養(yǎng)并凍存。
　　2建立32只人上皮性卵巢癌細(xì)胞株裸鼠皮下移植瘤膜型，隨機(jī)分成4組:(1) SKOV3/17D組:將轉(zhuǎn)染IL-17D的SKOV3細(xì)胞株種植于裸鼠皮下、，(2) SKOV3/neo組:將轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的SKOV3細(xì)胞株等量種植于裸鼠皮下

3、、，(3) OVCAR3/17D組:將轉(zhuǎn)染IL-17D的OVCAR3細(xì)胞株種植于裸鼠皮下，(4) OVCAR3/neo組:將轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的OVCAR3細(xì)胞株等量種植于裸鼠皮下。
　　3觀察裸鼠的成瘤率、腫瘤生長情況，用游標(biāo)卡尺定期測量裸鼠皮下移植瘤的大小，繪制腫瘤生長曲線。
　　4采用qRT-PCR法檢測各組裸鼠皮下移植瘤組織中IL-17D在RNA水平的表達(dá)量;ELISA法檢測各組荷瘤裸鼠血清中MICA的可溶性形式(solub

4、le MICA，sMICA)的表達(dá)水平;流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測腫瘤組織中MICA的膜性形式(membrane MICA，mMICA)表達(dá)水平。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，以P＜0.01為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1皮下接種4種細(xì)胞后，裸鼠成瘤率均為100％。接種SKOV3/17D細(xì)胞的裸鼠皮下移植瘤生長速度明顯快于SKOV3/neo組，OVCAR3/17D組明顯快于OVCAR3/neo組(P

5、＜0.01)。
　　2各組裸鼠皮下移植瘤組織中均有IL-17D基因的表達(dá)，SKOV3/17D組IL-17D的表達(dá)明顯高于SKOV3/neo組，OVCAR3/17D組高于OVCAR3/neo組（P＜0.01）。
　　3流式細(xì)胞術(shù)顯示，裸鼠皮下移植瘤組織中mMICA在各組中均表達(dá)，其含量以平均熒光強(qiáng)度(Mean Fluorescence Intensity, MFI)表示((X)±s):
　　3.1 SKOV3/17D組中

6、 MICA蛋白的MFI值為203.02±3.03，SKOV3/neo組為285.90±1.76，可見SKOV3/17D組MICA蛋白的表達(dá)量明顯低于SKOV3/neo組，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01）。
　　3.2 OVCAR3/17D組中MICA蛋白的MFI值為177.05±3.69，OVCAR3/neo組為265.12±2.29，可見OVCAR3/17D組MICA蛋白的表達(dá)量明顯低于OVCAR3/neo組，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

7、義(P＜0.01)。
　　4酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測得數(shù)據(jù)用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差（(X)±s）表示:
　　4.1 sMICA在SKOV3/17D和SKOV3/neo組裸鼠血清中的濃度分別為(28.85±0.36) ng/ml和(23.58±0.50)ng/ml，sMICA在SKOV3/17D組裸鼠血清中濃度高于SKOV3/neo組(P＜0.01)。
　　4.2 sMICA在OVCAR3/17D和OVCAR3/neo組裸

8、鼠血清中的濃度分別為(34.05±0.42) ng/ml和(27.24±0.51)ng/ml，sMICA在OVCAR3/17D組裸鼠血清中濃度高于OVCAR3/neo組（P＜0.01）。
　　結(jié)論:IL-17D基因明顯促進(jìn)人上皮性卵巢癌細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的生長，這種促瘤機(jī)制與NKG2D-MICA免疫殺傷通路有關(guān)， IL-17D可下調(diào)腫瘤細(xì)胞表面的活化性配體MICA的表達(dá)，增加sMICA釋放，進(jìn)而降低NK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷活性，使