人胃腸間質(zhì)瘤裸鼠移植瘤模型的建立及生物學(xué)特性的觀察.pdf

1、背景與目的:胃腸道間質(zhì)瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)是一類(lèi)胃腸道最常見(jiàn)的間葉源性腫瘤,其生物學(xué)行為常難以預(yù)測(cè),預(yù)后較差。GIST發(fā)病的主要機(jī)制是由于原癌基因c-kit突變性激活致使突變細(xì)胞增殖失控所形成的。GIST的c-kit基因突變率超過(guò)85％,突變主要發(fā)生在外顯子11、9、13和17;在GIST中,有少部分檢測(cè)不出c-kit基因的突變,在這些GIST中,約有7％存在血小板生長(zhǎng)因子受體A(

2、PDGFRA)基因的突變;GIST對(duì)放療和普通化療均不敏感,主要依靠手術(shù)治療,但術(shù)后50％的患者會(huì)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移。而針對(duì)酪氨酸激酶的分子靶向藥物——伊馬替尼的出現(xiàn)使得GIST的治療和預(yù)后明顯改觀。目前伊馬替尼是治療復(fù)、發(fā)轉(zhuǎn)移、手術(shù)不能切除GIST的一線藥物。然而最近伊馬替尼在治療GIST過(guò)程中出現(xiàn)繼發(fā)耐藥的現(xiàn)象不斷增加,產(chǎn)生耐藥性是GIST病人治療中最主要的挑戰(zhàn),但是具體的耐藥機(jī)制尚不清楚;另外,相對(duì)于胃癌、腸癌而言,GIST發(fā)病率比較低,

3、使得GIST的疾病資料不易收集,加之GIST體外原代細(xì)胞培養(yǎng)比較困難,在很大程度上限制了GIST基礎(chǔ)和臨床性研究。GIST發(fā)病機(jī)制及治療等一直是研究的熱點(diǎn),因此,本研究旨在建立人胃腸間質(zhì)瘤裸鼠移植瘤模型,探討其生物學(xué)特性、研究在裸鼠不同部位建立模型的方法,為進(jìn)一步研究GIST的發(fā)病機(jī)制、GIST對(duì)STI571的耐藥機(jī)制、為設(shè)計(jì)新的藥物來(lái)防止和克服STI571耐藥等提供一個(gè)較理想的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。
　　材料與方法:收集手術(shù)切除的人胃腸間質(zhì)

4、瘤新鮮瘤組織,取一部分新鮮腫瘤組織,迅速制備成約1mm~3大小的瘤組織塊,將103只裸鼠分成兩組:右側(cè)腋后皮下組50只,左側(cè)臀部皮下組53只,在裸鼠右側(cè)腋后皮下和左側(cè)臀部皮下接種瘤組織塊,分別建立移植瘤動(dòng)物模型,并進(jìn)行觀察,每6天測(cè)量一次腫瘤體積,根據(jù)測(cè)量所得體積,繪制移植瘤生長(zhǎng)曲線圖;觀察腫瘤外觀,裸鼠飲食情況、精神狀態(tài);處死荷瘤裸鼠時(shí)觀察有無(wú)肝、腹膜轉(zhuǎn)移,并行病理組織學(xué)和免疫組織化學(xué)檢測(cè)與人胃腸間質(zhì)瘤標(biāo)本進(jìn)行比較;免疫組織化學(xué)SP法

5、測(cè)定移植瘤細(xì)胞中CD117的表達(dá)情況。分析均在SPSS10.0軟件包上運(yùn)行,檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)為α=0.05,P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:移植瘤大體觀:圓形或類(lèi)圓形,腫瘤邊界清楚,表面光滑。解剖見(jiàn)腫瘤與裸鼠皮膚無(wú)粘連,易分離,包膜完整,可見(jiàn)毛細(xì)血管與腫瘤相連,HE染色顯示GIST瘤細(xì)胞大部分是梭形細(xì)胞,有少量上皮樣細(xì)胞。大部分梭形瘤細(xì)胞界限不清,未見(jiàn)肝臟和腹腔內(nèi)播散轉(zhuǎn)移。部分移植瘤晚期可見(jiàn)惡液質(zhì),SP免疫組織化學(xué)檢測(cè):CD

6、117在模型瘤組織中高表達(dá)。103只裸鼠中,荷瘤成功70只,成瘤率67.96％;從移植瘤生長(zhǎng)曲線可以看出,人胃腸間質(zhì)瘤組織塊接種于裸鼠后第6天至第30天生長(zhǎng)平穩(wěn),之后的時(shí)間生長(zhǎng)迅速。腋后皮下組50例中荷瘤成功者為40例,成瘤率為80％,CD117陽(yáng)性例數(shù)36例,陽(yáng)性率90％;臀部皮下組53例中荷瘤成功者為30例,成瘤率為56.6％,CD117陽(yáng)性例數(shù)24例,陽(yáng)性率80％。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)所建立的人胃腸間質(zhì)瘤裸鼠移植瘤模型從組織形

7、態(tài)學(xué),免疫組織化學(xué)等方面,均與人胃腸間質(zhì)瘤的生物學(xué)特性一致?？梢哉J(rèn)為是一個(gè)生物學(xué)特征較穩(wěn)定的人胃腸間質(zhì)瘤裸鼠移植瘤模型,為人胃腸間質(zhì)瘤的基礎(chǔ)研究及臨床治療提供了實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。1、本研究所建立的移植瘤模型的組織形態(tài)學(xué)、免疫組織化學(xué)等生物學(xué)特性均保持了人胃腸間質(zhì)瘤的特點(diǎn),說(shuō)明本研究直接采用新鮮人胃腸間質(zhì)瘤組織建立模型是可行的、成功的。2、在本研究所建立的皮下移植瘤模型中,裸鼠皮下不同部位所建模型的成瘤率有顯著差異:近頭側(cè)部位成功率較高,本實(shí)驗(yàn)表