卵黃囊瘤動物模型的建立及其生物學(xué)特性的研究.pdf

1、目的：建立可供試驗研究的穩(wěn)定的惡性畸胎瘤(卵黃囊瘤)動物模型,探討動物模型的制作方法及有關(guān)的生物學(xué)特征.比較不同的接種部位、接種方法的成瘤率,比較卵黃瘤動物模型異種移植和同種移植的不同的腫瘤生長潛伏期、生長曲線,通過免疫組織化學(xué)染色檢測動物模型標(biāo)本的甲胎蛋白(AFP)、胎盤堿性磷酸酶(PLAP)、細胞角蛋白(CKPan)的表達情況.過碘酸-雪夫氏法(P.A.S)檢測糖原表達,電子顯微鏡觀察腫瘤組織超微結(jié)構(gòu)、病理形態(tài)、動態(tài)監(jiān)測裸鼠血清AF

2、P變化情況,為臨床實驗研究提供良好的試驗動物模型. 方法：本實驗的標(biāo)本來源于附屬育英兒童醫(yī)院的一例畸胎瘤患兒,經(jīng)臨床病理證實為卵黃囊瘤.主要方法如下: 1.取新鮮的腫瘤組織標(biāo)本,切成1mm<'3>小快,分別接種于裸鼠背部皮下、腹股溝、腎被膜下、睪丸筋膜下. 2.取凍存復(fù)蘇的人卵巢畸胎瘤細胞株,調(diào)整其濃度為5×10<'7>/ml,取0.2ml注射入裸鼠前肢皮下. 3.觀察裸鼠成瘤的潛伏期,游標(biāo)卡尺定期觀察腫

3、瘤生長大小,繪制生長曲線. 4.動態(tài)檢測荷瘤鼠血清.AFP變化情況. 5.電子顯微鏡和HE染色觀察細胞超微形態(tài)結(jié)構(gòu)和病理變化和腫瘤轉(zhuǎn)移浸潤情況. 6.免疫組化SP法檢測AFP、PLAP、CK的表達. 7.過碘酸-雪夫氏法(P.A.S)檢測糖原表達. 8.月中瘤組織染色體標(biāo)本的制作、分析腫瘤細胞的染色體數(shù)目. 結(jié)果 1.異種移植不同的接種部位成瘤率各不相同:背部(10處)、腎被膜下(

4、10處)和睪丸(5處)的成瘤率為零,腹股溝(10處)的成瘤率為20﹪,潛伏期為32天. 2.人卵巢畸胎瘤細胞株的接種成瘤率為100﹪,腫瘤生長潛伏期短為21天. 3.荷瘤鼠的同種移植的潛伏期變化無明顯規(guī)律,成瘤率逐漸升高:三代的成瘤率分別為20﹪、40﹪、65﹪. 4.檢測菏瘤鼠血清的AFP變化隨時間延長而增高. 5.電子顯微鏡示腫瘤組織介于低分化和未分化之間,胚胎性為主,原始性.可見腺腔樣結(jié)構(gòu),具有微

5、小絨毛提示小腸粘膜上皮分化.HE染色示典型腫瘤樣惡性變,核大深染,失去極性,形成疏松網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),形似腎小球. 6.月中瘤標(biāo)本的免疫組化示卵黃囊瘤的標(biāo)志物AFP、PLAP、CK表達陽性,通過實驗組與對照組平均光密度的比較,對照組平均光密度值小于實驗組,有顯著性差異性(P<0.0127). 7.月中瘤標(biāo)本RA.S染色陽性:可見紅色粉染的透明樣玻璃小體.8月中瘤標(biāo)本染色體數(shù)目分析結(jié)果顯示染色體數(shù)目波動于34～86,可見染色體缺

6、失斷裂,不同于正常裸鼠和人染色體數(shù)目. 結(jié)論： 1.為國內(nèi)第一例卵黃囊動物模型的報道,目前以傳至第4代,成瘤率穩(wěn)定,暫命名WZ-YSTM2.用手術(shù)方法的動物腫瘤模型的制作比傳統(tǒng)的套管針注射更加簡易可行.3.腹股溝皮下移植有更高的致瘤率,瘤細胞株注射成瘤率比組織塊移植要高,同種之間隨著傳代次數(shù)增加成瘤率逐漸上升(20﹪、40﹪、65﹪).4.通過組織學(xué)、免疫組織化學(xué)、染色體遺傳學(xué)研究表明,動物腫瘤模型重現(xiàn)所來源的腫瘤的生物學(xué)特征.