水牛胎兒成纖維細(xì)胞系的建立及其生物學(xué)特性的研究.pdf

1、水牛是中國(guó)南方地區(qū)較為重要的一種家養(yǎng)動(dòng)物，在農(nóng)業(yè)耕作上一直將其作為勞力使用。近些年來(lái)隨著對(duì)水牛研究的不斷深入，其經(jīng)濟(jì)利用價(jià)值逐漸顯現(xiàn)出來(lái)，特別是將其作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)目的蛋白。目前尚未建立生物學(xué)特性明確的水牛細(xì)胞系，限制了在細(xì)胞水平研究和長(zhǎng)期保存水牛種質(zhì)資源，也妨礙了通過(guò)將穩(wěn)定表達(dá)外源基因的細(xì)胞作為核移植供體，獲得基因改造水牛的研究。因此，建立水牛細(xì)胞系并對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)特性的研究非常重要。
　　 從南寧市內(nèi)屠宰場(chǎng)獲取88只水牛胎

2、兒，對(duì)其耳緣、腎臟、皮膚進(jìn)行原代培養(yǎng)，從分離獲得的成纖維細(xì)胞中挑選出形態(tài)正常、生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)較好的細(xì)胞系，最后挑選出2個(gè)水牛胎兒皮膚成纖維細(xì)胞系(BFSF101107、BFSF101007)、1個(gè)水牛胎兒耳緣成纖維細(xì)胞系(BFEF)、1個(gè)水牛胎兒腎臟成纖維細(xì)胞系(BFKF)、1個(gè)水牛胎兒腎臟扁平狀成纖維細(xì)胞系(BFKF-Flat)。然后對(duì)這些細(xì)胞系分別進(jìn)行生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)測(cè)定、凍存前/復(fù)蘇后活率測(cè)定、微生物污染檢測(cè)、核型分析、同工酶檢測(cè)、熒光蛋白

3、轉(zhuǎn)染效率、細(xì)胞周期分析。這5個(gè)細(xì)胞系生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)測(cè)定結(jié)果所繪制的生長(zhǎng)曲線都為“S”型；細(xì)胞凍存前、復(fù)蘇后都具有較高的活率；微生物污染檢測(cè)的結(jié)果均為陰性。對(duì)這些細(xì)胞系進(jìn)行核型分析和同工酶分析檢測(cè)是否存在細(xì)胞交叉污染，結(jié)果顯示這些細(xì)胞絕大多數(shù)含有48條染色體(20代)，同工酶電泳圖譜顯示細(xì)胞系之間沒(méi)有交叉污染。相同轉(zhuǎn)染條件下，在綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白的表達(dá)效率上BFSF101107的最高，在表達(dá)強(qiáng)度上BFKF-Flat的最強(qiáng)。接著，對(duì)各細(xì)

4、胞系第20代細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞周期分析，結(jié)果BFSF101107與他細(xì)胞系相比，細(xì)胞之間染色體均一性好、畸變概率低。因此，基于細(xì)胞的后續(xù)研究可以依據(jù)這些細(xì)胞系的不同生物學(xué)特性進(jìn)行相應(yīng)的選擇。
　　 在無(wú)抗生素條件下，成功建立了2個(gè)水牛胎兒皮膚成纖維細(xì)胞系(BFSF101107、BFSF101007)、1個(gè)水牛胎兒耳緣成纖維細(xì)胞系(BFEF)、1個(gè)水牛胎兒腎臟成纖維細(xì)胞系(BFKF)、1個(gè)水牛胎兒腎臟扁平狀成纖維細(xì)胞系(BFKF-Fla