海洋生物Ⅰ號(hào)提取物對(duì)人肝癌裸鼠移植瘤的作用及機(jī)制.pdf

1、目的:
　　從海洋生物Ⅰ號(hào)中提取、分離出抗腫瘤活性成分，研究其對(duì)人肝癌細(xì)胞系（HepG2）裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響及作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.采用乙醇冷浸漬法和系統(tǒng)溶劑法從海洋生物Ⅰ號(hào)中提取，分離活性成分。
　　2.MTT法檢測(cè)海洋生物Ⅰ號(hào)提取物體外對(duì)人肝癌細(xì)胞系HepG2的生長(zhǎng)抑制作用。
　　3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞DNA含量（分析細(xì)胞周期和凋亡），檢測(cè)HepG2細(xì)胞的PCNA，Cyclin D1和Cyc

2、linA蛋白表達(dá)。
　　4.激光共聚焦掃描顯微鏡熒光定量法檢測(cè)HepG2細(xì)胞PCNA蛋白的表達(dá)。
　　5.用皮下注射法建立人肝癌細(xì)胞系HepG2裸鼠移植瘤模型;通過(guò)腹腔給藥途徑和瘤近似體積測(cè)量，瘤倍增時(shí)間測(cè)定，瘤重測(cè)定，病理檢驗(yàn)，免疫組織化學(xué)方法等來(lái)觀察海洋生物Ⅰ號(hào)提取物對(duì)人肝癌細(xì)胞系HepG2裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用。
　　結(jié)果:
　　1.新鮮的海洋生物Ⅰ號(hào)經(jīng)乙醇冷浸漬法提取和系統(tǒng)溶劑液液萃取法分離得到石油醚提

3、取物，乙酸乙酯提取物和水飽和正丁醇提取物，即提取物A、B和C，提取率分別是0.5％，0.2％和0.18％。
　　2.海洋生物Ⅰ號(hào)提取物體外對(duì)人肝癌細(xì)胞系HepG2生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:提取物A、B、C在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)均有不同程度抑制作用，并呈現(xiàn)明顯的時(shí)-效和量-效依賴性。但提取物B對(duì)人肝癌細(xì)胞系HepG2生長(zhǎng)抑制作用最強(qiáng)，提取物C次之，提取物A作用最弱。
　　3.裸鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:成功復(fù)制人肝癌細(xì)胞系H

4、epG2裸鼠移植瘤模型，海洋生物Ⅰ號(hào)B提取物對(duì)人肝癌細(xì)胞系HepG2裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，提取物B高，中，低劑量組的生長(zhǎng)抑制率分別是34.07％，23.70％和21.04％。
　　4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HepG2細(xì)胞DNA含量（分析細(xì)胞周期和凋亡），檢測(cè) HepG2細(xì)胞的PCNA、Cyclin D1和Cyclin A蛋白表達(dá)量。檢測(cè)結(jié)果顯示:海洋生物Ⅰ號(hào)乙酸乙酯提取物能使人肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞周期阻滯于S期，隨著提取

5、物的濃度升高，S期細(xì)胞逐漸增多。HepG2細(xì)胞的PCNA蛋白表達(dá)水平隨著提取物處理濃度的增高而增強(qiáng)。Cyclin D1和Cyclin A蛋白表達(dá)水平隨著提取物處理濃度的增高而逐漸降低，與對(duì)照組比較均有顯著性差異。
　　5.激光共聚焦掃描顯微鏡熒光定量法檢測(cè)HepG2細(xì)胞PCNA蛋白表達(dá)，檢測(cè)結(jié)果顯示:海洋生物Ⅰ號(hào)提取物B能使HepG2細(xì)胞PCNA蛋白表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞核顯綠熒光，隨著提取物B的濃度升高，陽(yáng)性細(xì)胞逐漸增多，熒光強(qiáng)度也增強(qiáng)

6、，并且與對(duì)照組比較均有顯著性差異。免疫組織化學(xué)方法測(cè)裸鼠移植瘤組織PCNA蛋白的表達(dá)，顯示隨著提取物B濃度的提高，裸鼠移植瘤組織PCNA染色表達(dá)增強(qiáng)，其中以提取物B高劑量組染色表達(dá)最高，為棕色深染。
　　結(jié)論:
　　1.海洋生物Ⅰ號(hào)提取物A，B、C在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)人肝癌細(xì)胞系HepG2生長(zhǎng)均有不同程度抑制作用，并呈現(xiàn)明顯的時(shí)-效和量-效依賴性。海洋生物Ⅰ號(hào)提取物B對(duì)人肝癌細(xì)胞系HepG2生長(zhǎng)抑制作用最強(qiáng)，提取物C次之，提取物A