鼻咽癌CNE-l及CNE-l-taxol裸鼠移植瘤模型的建立及生物學(xué)特性差異的研究.pdf

1、目的:
　　 1.建立人鼻咽癌CNE-1及CNE-1/taxol裸鼠皮下移植瘤模型,并研究其生物學(xué)特性;
　　 2.研究CNE-1及CNE-1/taxol裸鼠皮下移植瘤對紫杉醇及順鉑的敏感性,在體內(nèi)證明順鉑能否逆轉(zhuǎn)鼻咽癌紫杉醇耐藥;
　　 3.探討B(tài)cl-2,VEGF,TSP1基因在鼻咽癌紫杉醇耐藥及順鉑逆轉(zhuǎn)鼻咽癌紫杉醇耐藥的分子機(jī)制中的作用。
　　 方法:
　　 1.細(xì)胞培養(yǎng):人鼻咽癌細(xì)胞系CN

2、E-1及其耐藥細(xì)胞亞系CNE-1/taxol培養(yǎng)于含14％小牛血清培養(yǎng)基,培養(yǎng)條件為37℃,5％C02,飽和濕度孵箱,用含0.25％胰蛋白酶和0.02％EDTA的完全消化液消化傳代。
　　 2.建立人鼻咽癌CNE-1及CNE-1/taxol裸鼠皮下移植瘤模型及分組:將上述人鼻咽癌細(xì)胞株制備成濃度約1×107/ml的細(xì)胞懸液,分別種植于4只6-8周齡裸鼠腋窩皮下。待腫瘤長至直徑約8mm時(共需45天,成瘤率約50％),將其取下,剪

3、成直徑為1-2mm瘤塊,分別種植于24只6-8周齡裸鼠左、右側(cè)腹皮下(左側(cè)接種CNE-1移植瘤,右側(cè)接種CNE-1/taxol移植瘤),待腫瘤長至直徑約5mm(共需14天,成瘤率100％),隨機(jī)分成3組進(jìn)行藥物治療:①空白對照組:無菌生理鹽水;②紫杉醇組:紫杉醇10mg/kg;⑨順鉑組:順鉑5mg/kg,均為腹腔注射(0.2ml/只/次,5次/每周)。
　　 3.實(shí)驗(yàn)指標(biāo)觀察及標(biāo)本采集、處理:注射藥物后,每天觀察移植瘤及裸鼠生存

4、狀態(tài),隔天測量裸鼠重量,用游標(biāo)卡尺測量移植瘤的最長徑(a)和最短徑(b),計(jì)算移植瘤的體積(V,V=1/2ab2),繪制皮下移植瘤生長曲線,計(jì)算各組移植瘤生長倍數(shù)及給藥組移植瘤生長抑制率。
　　 4.停藥2天后處死裸鼠并切除皮下移植瘤,10％甲醛固定,免疫組織化學(xué)法檢測各組移植瘤組織Bcl-2,VEGF,TSP1的表達(dá)情況。
　　 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:SPSS for windows17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,數(shù)據(jù)以均數(shù)

5、±標(biāo)準(zhǔn)差(M±SD)表示,統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用兩樣本t檢驗(yàn),先對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性分析,若方差相等采用方差相等的兩樣本t檢驗(yàn),若方差不等,采用方差不等情形的兩樣本t'檢驗(yàn),P＜0.05認(rèn)為差異有顯著性。
　　 結(jié)果:
　　 1.細(xì)胞懸液接種法種植人鼻咽癌CNE-1及CNE-1/taxol移植瘤成瘤潛伏期長,約30天,長至直徑約8mm共需45天,且成瘤率不高,約50％;新鮮組織塊接種法幾乎無潛伏期,長至直徑約5mm共需14天,且成

6、瘤率高,達(dá)100％。
　　 2.CNE-1及CNE-1/taxol移植瘤經(jīng)生理鹽水處理后,生長1周,其生長倍數(shù)分別為(2.53±0.31),(1.79±0.27),兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示CNE-1/taxol移植瘤生長速率慢于CNE-1移植瘤。
　　 3.CNE-1及CNE-1/taxol移植瘤經(jīng)紫杉醇處理后,生長1周,其移植瘤生長抑制率分別為(67.14±13.03)％,(35.84±35.3)％,兩者相比,差

7、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),提示CNE-1/taxol移植瘤對紫杉醇耐藥。
　　 4.CNE-1及CNE-1/taxol移植瘤經(jīng)順鉑處理后,生長1周,其移植瘤生長抑制率分別為(44.71±14.80)％,(50.73±11.38)％,紫杉醇耐藥細(xì)胞CNE-1/taxol移植瘤對順鉑更加敏感,但兩者比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 5.免疫組化檢測顯示:
　　 ①Bcl-2:對照組CNE-1移植瘤

8、Bcl-2的表達(dá)高于CNE-1/taxol;經(jīng)紫杉醇處理后CNE-1移植瘤表達(dá)降低,CNE-1/taxol無明顯變化;經(jīng)順鉑處理后CNE-1移植瘤表達(dá)無明顯變化,CNE-1/taxol表達(dá)升高。
　　 ②VEGF:對照組CNE-1移植瘤VEGF的表達(dá)高于CNE-1/taxol;經(jīng)紫杉醇處理后CNE-1移植瘤表達(dá)降低,CNE-1/taxol表達(dá)升高;經(jīng)順鉑處理后CNE-1及CNE-1/taxol移植瘤表達(dá)均無明顯變化;
　　

9、 ⑨TSP1:對照組CNE-1移植瘤TSP1的表達(dá)高于CNE-1/taxol;經(jīng)紫杉醇處理后CNE-1及CNE-1/taxol移植瘤表達(dá)均降低;經(jīng)順鉑處理后CNE-1移植瘤表達(dá)無明顯變化,CNE-1/taxol表達(dá)明顯升高。
　　 結(jié)論:
　　 1.新鮮組織塊接種法是建立人鼻咽癌CNE-1及CNE-1/taxol裸鼠皮下移植瘤模型的較好方法。
　　 2.紫杉醇、順鉑均對裸鼠人鼻咽癌CNE-1移植瘤的生長有明顯的