裸鼠肌肉移植瘤模型對研究鼻咽癌亞臨床灶意義.pdf

1、目的：以人鼻咽癌CNE1細胞系為例建立的balb/c裸鼠肌肉內移植瘤模型，觀察高分化細胞系CNE1在體內的生物學行為及生長侵襲能力，為下一步研究鼻咽高分化癌亞臨床灶在活體內的顯像建立合適的動物模型。此動物模型的移植瘤需無包膜，腫瘤細胞較易向周圍組織侵襲，以便于我們對移植瘤周圍正常組織中侵襲的單個腫瘤細胞的生物學特性的研究。
　　 材料：人鼻咽癌CNE1細胞株（LMP1表達陽性）；胎牛血清；RPMI-1640培養(yǎng)基、胰蛋白酶；LM

2、P1（CS1-4）單克隆抗體；pEGFP-C1質粒；梭華-SofastTM轉染試劑；質粒抽提試劑盒（V-gene）；SABC二抗試劑盒；4-6周齡balb/c裸鼠；TJ-TY-500型全自動圖像分析系統(tǒng)；超凈細胞培養(yǎng)實驗室及SPF層流動物房。
　　 方法：體外培養(yǎng)LMP1陽性表達的CNE1細胞系，細胞爬片后固定，免疫熒光證實LMP1的表達清情況。pEGFP-C1質粒體外轉染CNE1細胞系,篩選穩(wěn)定表達綠色熒光蛋白的細胞克隆并擴大

3、培養(yǎng),做流式細胞儀和熒光顯微鏡檢測。動物分為三組，分別將帶有pEGFP基因的細胞株、不帶有EGFP基因的細胞株擴增后制成濃度為1.0×107細胞懸液,將不帶EGFP基因的細胞株于半小時內分別種植于兩組balb/c 裸鼠臀大肌或背部皮下；將帶EGFP基因的細胞株于半小時內種植于第三組balb/c 裸鼠臀大肌內。定期觀察并測量移植瘤大小，待有裸鼠瀕臨死亡時處死全部裸鼠取標本，4%多聚甲醛固定后石蠟包埋，做連續(xù)石蠟切片，第三組裸鼠相鄰切片分別

4、做冰凍切片、蘇木素-伊紅（HE）和免疫組化染色。圖像分析以及熒光顯微鏡觀察并比較腫瘤細胞浸潤及轉移情況。
　　 結果：皮下移植瘤潛伏期長，生長較慢，腫瘤體積小，腫瘤周圍可見明顯包膜包繞；肌肉移植瘤腫瘤細胞向周圍組織侵襲明顯，腫瘤組織和周圍正常組織界限不清，周圍淋巴結和遠處轉移率較皮下移植瘤高。組織切片可見肌肉組織內癌巢形成,并且有癌細胞侵入肌細胞現(xiàn)象；不帶有EGFP基因的兩組細胞株進行比較，皮下移植瘤平均潛伏期為（15.40±2

5、.46），腫瘤倍增時間為（3.01±0.32），平均瘤重（1.13±0.15），淋巴結和肝臟轉移率低（41.7%）。而肌肉組移植瘤體內平均潛伏期(11.92±2.02d)和瘤體平均倍增時間(2.32±0.24d)明顯縮短(P<0.01)，平均瘤重明顯增加(1.32±0.17g，P<0.05)，淋巴結和肝臟轉移率明顯增高(41.7%/100%,P<0.05),而成瘤率無顯著差異(83.3%/100%,P>0.05)。
　　 EGF

6、P在裸鼠體內穩(wěn)定表達，且不影響細胞在體內的增值與轉移，移植瘤重量為（1.33±0.11g），潛伏期為（10.98±2.21），倍增時間為（2.29±0.62），與未傳染EGFP組無顯著統(tǒng)計學差異。冰凍切片在熒光顯微鏡下直接觀察，較容易直接區(qū)分腫瘤區(qū)與非腫瘤區(qū)，并能發(fā)現(xiàn)向周圍侵襲的腫單個腫瘤細胞，其敏感性及特異性明顯優(yōu)于HE染色和免疫組化方法。
　　 結論：鼻咽癌高分化細胞系CNE1的裸鼠肌肉移植瘤模型在體內的生長侵襲能力強，腫瘤