二甲雙胍聯(lián)合順鉑對(duì)人肺癌裸鼠移植瘤的治療作用及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的:肺癌是發(fā)病率和死亡率增長(zhǎng)最快，對(duì)人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。近50年來(lái)許多國(guó)家都報(bào)道肺癌的發(fā)病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發(fā)病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的第一位，女性發(fā)病率占第二位，死亡率占第二位。盡管存在多種治療手段，其總的5年生存率仍無(wú)明顯改觀。肺癌已是全球死亡的首要原因。每年大約有百萬(wàn)人，包括85萬(wàn)名男性和33萬(wàn)名女性死于肺癌。在我國(guó)，肺癌的年發(fā)病率為35/10萬(wàn)人，其中80％-90％的患者為非小細(xì)胞肺癌(non

2、-small cell lung cancer，NSCLC)。糖尿病也是常見(jiàn)病、多發(fā)病，2型糖尿病占糖尿病絕大多數(shù)。同時(shí)患2型糖尿病和惡性腫瘤的人數(shù)不斷增加，2型糖尿病患者發(fā)生各種惡性腫瘤的機(jī)率比正常人群大大增加。二甲雙胍為雙胍類口服降糖藥物，廣泛適合于2型糖尿病BMI＞25kg/m2的患者及具有胰島素抵抗的患者，是美國(guó)糖尿病學(xué)會(huì)(American Diabetes Association，ADA)和歐洲糖尿病研究協(xié)會(huì)(European

3、 Association for the Study of Diabetes，EASD)共識(shí)推薦的糖尿病一線治療的最佳選擇。它不但可以抑制糖原異生和分解，降低過(guò)高的肝糖原輸出，延緩葡萄糖在腸道的吸收，同時(shí)還可延緩胰島β細(xì)胞衰竭。近年研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)用二甲雙胍可減少糖尿病患者惡性腫瘤發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，增強(qiáng)化療藥物的作用，其抗腫瘤作用或是否作為一種抗腫瘤藥物已受到糖尿病和腫瘤學(xué)術(shù)領(lǐng)域的重視。近年的臨床研究發(fā)現(xiàn)，服用二甲雙胍治療的糖尿病患

4、者，腫瘤發(fā)生率明顯下降，從而揭開(kāi)了二甲雙胍在腫瘤領(lǐng)域研究的序幕，并逐漸成為研究的“亮點(diǎn)”。多項(xiàng)研究顯示二甲雙胍可能有降低腫瘤發(fā)生率的作用，其作用機(jī)制:①通過(guò)ATM-LKB1-AMPK-mTOR途徑，二甲雙胍直接抑制腫瘤作用②二甲雙胍可以降低胰島素水平，這一機(jī)制可能是二甲雙胍抑制惡性腫瘤的重要間接機(jī)制③二甲雙胍可以誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯和凋亡，并能降低生長(zhǎng)因子信號(hào)④降低細(xì)胞周期蛋白水平⑤抑制原癌基因HER2⑥抗炎作用⑦提高T細(xì)胞的記憶⑧其他。順

5、鉑為常用的鉑類抗癌藥物。本研究經(jīng)建立人肺癌裸鼠移植瘤模型，并研究二甲雙胍聯(lián)合常用的化療藥物順鉑，對(duì)于人肺癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用及對(duì)Survivin、MMP-2、VEGF-C和VEGFR-3分子表達(dá)的影響，并探討其作用機(jī)制，致力于探索治療肺癌的新的有效藥物。
　　方法:選取4～5周齡BALB/c雄性裸小鼠33只，在特定條件下飼養(yǎng)，取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肺癌A549細(xì)胞接種于裸鼠左側(cè)腋部皮下，從而建立肺癌裸鼠移植瘤模型。當(dāng)移植瘤生長(zhǎng)直徑

6、達(dá)4mm時(shí)，除去腫瘤結(jié)節(jié)體積最小的一只裸鼠。將裸鼠隨機(jī)分組為二甲雙胍組、順鉑組、二甲雙胍聯(lián)合順鉑組及對(duì)照組。順鉑組裸鼠給予腹腔注射順鉑注射液5mg/kg/次，每周給藥1次，同時(shí)口服滅菌的蒸餾水;二甲雙胍組裸鼠給予二甲雙胍200mg/kg/d灌胃，同時(shí)腹腔注射同等量生理鹽水;二甲雙胍聯(lián)合順鉑組給予二甲雙胍灌胃和順鉑腹腔注射，用量與兩藥單一用藥組相同;對(duì)照組口服滅菌蒸餾水，腹腔注射等量生理鹽水。給藥42天后，處死動(dòng)物，留取腫瘤組織。免疫組織

7、化學(xué)法檢測(cè)腫瘤組織中Survivin、MMP-2、VEGF-C和VEGFR-3蛋白的表達(dá)，用北航真彩色病理圖像分析系統(tǒng)計(jì)算平均積分光密度值。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)瘤組織中Survivin、MMP-2、VEGF-C和VEGFR-3的表達(dá)。
　　結(jié)果:以病理圖像分析系統(tǒng)測(cè)定Survivin、MMP-2、VEGF-C和VEGFR-3蛋白免疫組織化學(xué)染色切片積分光密度值，統(tǒng)計(jì)分析顯示，與對(duì)照組比較，順鉑組及二甲雙胍/順鉑聯(lián)合用藥組Sur

8、vivin、MMP-2、VEGF-C和VEGFR-3蛋白表達(dá)水平均降低（分別P＜0.05）;與對(duì)照組比較，二甲雙胍組MMP-2蛋白表達(dá)水平降低（P＜0.05）;與二甲雙胍組、順鉑組比較，二甲雙胍/順鉑聯(lián)合用藥組Survivin、MMP-2、VEGF-C和VEGFR-3蛋白表達(dá)水平均降低(分別P＜0.05)。
　　熒光實(shí)時(shí)定量PCR法測(cè)定Survivin、MMP-2、VEGF-C和VEGFR-3mRNA的表達(dá)，分析結(jié)果顯示，與對(duì)照組

9、比較，二甲雙胍組MMP-2 mRNA表達(dá)水平降低（P＜0.05）;順鉑組、二甲雙胍/順鉑聯(lián)合用藥組Survivin、MMP-2、VEGF-C和VEGFR-3 mRNA表達(dá)水平均降低（分別P＜0.05）;與二甲雙胍組和順鉑組比較，二甲雙胍/順鉑聯(lián)合用藥組Survivin、MMP-2、VEGF-C和VEGFR-3 mRNA表達(dá)水平均降低(分別P＜0.05)。
　　結(jié)論:二甲雙胍組可抑制MMP-2的表達(dá)。順鉑組及二甲雙胍/順鉑聯(lián)合用藥組