二甲雙胍對大鼠焦慮和恐懼行為的作用及機制.pdf

1、第一部分、二甲雙胍拮抗大鼠焦慮樣行為的機制
　　目的：前期實驗表明，二甲雙胍通過激活A(yù)MPK-FOXO3a-GABARAP信號通路，促進GABAA受體膜轉(zhuǎn)運，并具有快速抗焦慮作用。那么，二甲雙胍的抗焦慮作用是否與AMPK-FOXO3a-GABARAP信號通路激活有關(guān)呢？基于此，本部分實驗主要是通過行為學(xué)探討二甲雙胍快速抗焦慮作用的機制。
　　方法：采用曠場實驗及高架十字迷宮實驗檢測shRNA-AMPK和shRNA-FOXO3

2、a對二甲雙胍抗焦慮作用以及自發(fā)活動等的影響；采用western blotting檢測海馬CA1區(qū)shRNA-AMPK和shRNA-FOXO3a沉默效率；采用曠場實驗和高架十字迷宮檢測特異性干擾肽TAT-GABARAP本身對于基礎(chǔ)焦慮水平的影響。
　　結(jié)果：
　?。?）海馬CA1區(qū)shRNA-AMPK阻斷二甲雙胍在曠場實驗和高架十字迷宮實驗中的抗焦慮作用。海馬CA1區(qū)給予shRNA-AMPK后，二甲雙胍不能增加大鼠進入中央?yún)^(qū)的

3、時間，亦不能增加大鼠進入開放臂的時間。
　?。?）海馬CA1區(qū)shRNA-FOXO3a阻斷二甲雙胍在曠場實驗和高架十字迷宮實驗中的抗焦慮作用。海馬CA1區(qū)給予shRNA-FOXO3a抑制二甲雙胍促進大鼠進入中央?yún)^(qū)的時間，以及進入開放臂的時間。
　?。?）TAT-GABARAP干擾肽不影響動物的自發(fā)活動能力和基礎(chǔ)焦慮水平，表現(xiàn)為TAT-GABARAP干擾肽不影響大鼠在曠場實驗中進入中央?yún)^(qū)的時間，也不影響大鼠高架十字迷宮實驗中進

4、入開放臂的時間。
　?。?）二甲雙胍對焦慮樣行為的改善作用均不影響自發(fā)活動。
　　結(jié)論：治療II型糖尿病藥物二甲雙胍通過激活A(yù)MPK-FOXO3a-GABARAP信號通路而產(chǎn)生快速抗焦慮樣行為的作用，為二甲雙胍用于臨床治療焦慮癥提供了實驗依據(jù)。
　　第二部分、二甲雙胍對大鼠線索型恐懼記憶消散的作用及機制
　　目的：研究報道證實基底外側(cè)杏仁核BLA區(qū)促進GABAA受體的膜轉(zhuǎn)運有利于調(diào)控恐懼記憶消散，而本實驗前期研究

5、發(fā)現(xiàn)二甲雙胍促進海馬神經(jīng)元GABAA受體膜轉(zhuǎn)運，那么二甲雙胍對于線索依賴性條件恐懼記憶消散有何影響呢？目前尚未有報道。因此，本部分主要研究二甲雙胍對線索依賴性條件恐懼記憶消散的作用及其機制。
　　方法：采用條件恐懼實驗檢測濃度梯度二甲雙胍對恐懼記憶的作用；采用曠場實驗檢測二甲雙胍對自發(fā)活動能力和焦慮樣行為的影響；采用足底電擊方式檢測二甲雙胍對痛閾的影響，采用強生血糖測試儀及試紙檢測二甲雙胍對正常血糖水平的影響；采用腦區(qū)局部給藥結(jié)合

6、條件恐懼實驗考查TAT-GABARAP干擾肽對二甲雙胍易化消散作用的影響。
　　結(jié)果：
　?。?）腹腔注射100mg/kg劑量二甲雙胍，顯著降低經(jīng)過短時間消散訓(xùn)練的SD大鼠的僵直率，易化恐懼記憶的消散，而50mg/kg和200mg/kg則對恐懼消散無影響；
　?。?）二甲雙胍易化消散的作用不影響影響動物自發(fā)活動能力，以及機體對傷害性反應(yīng)的閾值，亦不改變正常的血糖水平，
　　（3）BLA腦區(qū)給予TAT-GABARA