二甲雙胍聯(lián)合吉非替尼抑制膀胱癌的作用及其機(jī)理研究.pdf

1、目的:研究二甲雙胍單用對膀胱癌細(xì)胞的抑制作用及機(jī)制，評價不同給藥方式對小鼠膀胱癌生長的影響;之后，進(jìn)一步探討表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(epidermal growth factor receptor-tyrosinekinase inhibitors，EGFR-TKI)的代表藥物吉非替尼與二甲雙胍聯(lián)用的體內(nèi)、外抗膀胱癌藥效及藥物作用機(jī)制。
　　方法:MTT法、細(xì)胞集落形成實驗分別檢測藥物對膀胱癌細(xì)胞增殖、克隆形成的影響;w

2、estern blot檢測細(xì)胞內(nèi)AMPK(Adenosine5'-monophosphate(AMP)-activated protein kinase)、EGFR信號通路相關(guān)蛋白的變化。采用原位小鼠膀胱癌模型檢測藥物體內(nèi)抗癌活性，經(jīng)灌胃、膀胱灌注給藥二甲雙胍，比較其藥物效果;實驗過程對小鼠進(jìn)行尾部采血，用乳酸試劑盒檢測血清乳酸濃度。實驗結(jié)束后取小鼠膀胱組織進(jìn)行免疫組化，比較各組小鼠HE(hematoxylinandeosin)、Ki-

3、67的變化。用同樣的小鼠模型，采用膀胱灌注給藥方式對二甲雙胍與吉非替尼聯(lián)用的抗癌效果進(jìn)行評價。
　　結(jié)果:用二甲雙胍處理多種膀胱癌細(xì)胞的MTT實驗表明二甲雙胍呈劑量依賴抑制膀胱癌細(xì)胞生長，而細(xì)胞克隆形成實驗發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍在低濃度(0.5mM)能促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞集落形成，當(dāng)濃度為4mM時，二甲雙胍對膀胱癌細(xì)胞集落形成的抑制能力顯著增加;模擬膀胱灌注給藥方式的研究結(jié)果表明，二甲雙胍能有效抑制膀胱癌細(xì)胞集落形成。藥物作用機(jī)制方面，west

4、ern blot結(jié)果表明二甲雙胍在膀胱癌細(xì)胞中主要通過激活A(yù)MPK信號通路，降低下游靶蛋白活性來發(fā)揮抗膀胱癌作用;在不同膀胱癌細(xì)胞中，二甲雙胍與AMPK抑制劑Compound C聯(lián)用，MTT實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)Compound C減弱二甲雙胍對膀胱癌細(xì)胞增殖的抑制作用。另一方面，二甲雙胍抑制與細(xì)胞生長、增殖密切關(guān)聯(lián)的AKT、ERK蛋白磷酸化水平，當(dāng)二甲雙胍與AKT、ERK特異性抑制劑分別聯(lián)用后，MTT結(jié)果表明兩藥聯(lián)用協(xié)同抑制膀胱癌細(xì)胞增殖，聯(lián)用

5、指數(shù)(CI，compusyn index)值均小于1，western blot也證實兩藥聯(lián)用進(jìn)一步降低AKT或ERK蛋白磷酸化水平。利用原位同種膀胱癌模型對藥物體內(nèi)活性進(jìn)行評價，對二甲雙胍進(jìn)行不同方式給藥，研究發(fā)現(xiàn)膀胱灌注給藥能顯著抑制小鼠膀胱癌生長并未觀察到明顯的毒性反應(yīng)。將二甲雙胍與吉非替尼聯(lián)用于多種膀胱癌的MTT、clonogenic實驗表明兩藥聯(lián)用能協(xié)同抑制腫瘤細(xì)胞生長，藥物作用機(jī)制方面，一方面二甲雙胍通過激活A(yù)MPK信號通路增

6、強吉非替尼抗膀胱癌生長的效果;另一方面，二甲雙胍和吉非替尼通過共同抑制AKT/ERK蛋白磷酸化從而發(fā)揮協(xié)同抗膀胱癌作用。藥物體內(nèi)活性評價亦采用原位同種膀胱癌模型，與體外抗膀胱腫瘤效果一致。
　　結(jié)論:1、體外和體內(nèi)研究表明二甲雙胍能抑制膀胱癌生長，二甲雙胍和吉非替尼聯(lián)用表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)。
　　2、二甲雙胍通過激活A(yù)MPK信號通路以及降低AKT、ERK蛋白磷酸化水平發(fā)揮抗膀胱癌作用;二甲雙胍和吉非替尼聯(lián)用共同抑制AKT/ERK蛋