二甲雙胍聯(lián)合吉非替尼抑制膀胱癌的作用及其機(jī)理研究.pdf

1、目的:研究二甲雙胍單用對(duì)膀胱癌細(xì)胞的抑制作用及機(jī)制，評(píng)價(jià)不同給藥方式對(duì)小鼠膀胱癌生長(zhǎng)的影響;之后，進(jìn)一步探討表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑(epidermal growth factor receptor-tyrosinekinase inhibitors，EGFR-TKI)的代表藥物吉非替尼與二甲雙胍聯(lián)用的體內(nèi)、外抗膀胱癌藥效及藥物作用機(jī)制。
　　方法:MTT法、細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)藥物對(duì)膀胱癌細(xì)胞增殖、克隆形成的影響;w

2、estern blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)AMPK(Adenosine5'-monophosphate(AMP)-activated protein kinase)、EGFR信號(hào)通路相關(guān)蛋白的變化。采用原位小鼠膀胱癌模型檢測(cè)藥物體內(nèi)抗癌活性，經(jīng)灌胃、膀胱灌注給藥二甲雙胍，比較其藥物效果;實(shí)驗(yàn)過(guò)程對(duì)小鼠進(jìn)行尾部采血，用乳酸試劑盒檢測(cè)血清乳酸濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取小鼠膀胱組織進(jìn)行免疫組化，比較各組小鼠HE(hematoxylinandeosin)、Ki-

3、67的變化。用同樣的小鼠模型，采用膀胱灌注給藥方式對(duì)二甲雙胍與吉非替尼聯(lián)用的抗癌效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果:用二甲雙胍處理多種膀胱癌細(xì)胞的MTT實(shí)驗(yàn)表明二甲雙胍呈劑量依賴(lài)抑制膀胱癌細(xì)胞生長(zhǎng)，而細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍在低濃度(0.5mM)能促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞集落形成，當(dāng)濃度為4mM時(shí)，二甲雙胍對(duì)膀胱癌細(xì)胞集落形成的抑制能力顯著增加;模擬膀胱灌注給藥方式的研究結(jié)果表明，二甲雙胍能有效抑制膀胱癌細(xì)胞集落形成。藥物作用機(jī)制方面，west

4、ern blot結(jié)果表明二甲雙胍在膀胱癌細(xì)胞中主要通過(guò)激活A(yù)MPK信號(hào)通路，降低下游靶蛋白活性來(lái)發(fā)揮抗膀胱癌作用;在不同膀胱癌細(xì)胞中，二甲雙胍與AMPK抑制劑Compound C聯(lián)用，MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)Compound C減弱二甲雙胍對(duì)膀胱癌細(xì)胞增殖的抑制作用。另一方面，二甲雙胍抑制與細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖密切關(guān)聯(lián)的AKT、ERK蛋白磷酸化水平，當(dāng)二甲雙胍與AKT、ERK特異性抑制劑分別聯(lián)用后，MTT結(jié)果表明兩藥聯(lián)用協(xié)同抑制膀胱癌細(xì)胞增殖，聯(lián)用

5、指數(shù)(CI，compusyn index)值均小于1，western blot也證實(shí)兩藥聯(lián)用進(jìn)一步降低AKT或ERK蛋白磷酸化水平。利用原位同種膀胱癌模型對(duì)藥物體內(nèi)活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，對(duì)二甲雙胍進(jìn)行不同方式給藥，研究發(fā)現(xiàn)膀胱灌注給藥能顯著抑制小鼠膀胱癌生長(zhǎng)并未觀察到明顯的毒性反應(yīng)。將二甲雙胍與吉非替尼聯(lián)用于多種膀胱癌的MTT、clonogenic實(shí)驗(yàn)表明兩藥聯(lián)用能協(xié)同抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，藥物作用機(jī)制方面，一方面二甲雙胍通過(guò)激活A(yù)MPK信號(hào)通路增

6、強(qiáng)吉非替尼抗膀胱癌生長(zhǎng)的效果;另一方面，二甲雙胍和吉非替尼通過(guò)共同抑制AKT/ERK蛋白磷酸化從而發(fā)揮協(xié)同抗膀胱癌作用。藥物體內(nèi)活性評(píng)價(jià)亦采用原位同種膀胱癌模型，與體外抗膀胱腫瘤效果一致。
　　結(jié)論:1、體外和體內(nèi)研究表明二甲雙胍能抑制膀胱癌生長(zhǎng)，二甲雙胍和吉非替尼聯(lián)用表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)。
　　2、二甲雙胍通過(guò)激活A(yù)MPK信號(hào)通路以及降低AKT、ERK蛋白磷酸化水平發(fā)揮抗膀胱癌作用;二甲雙胍和吉非替尼聯(lián)用共同抑制AKT/ERK蛋