二甲雙胍對口腔鱗癌細(xì)胞的生長抑制作用及其機(jī)理研究.pdf

1、目的：二甲雙胍是臨床上最常見的口服降糖藥。近年來，研究發(fā)現(xiàn)該藥除了有降糖作用外，還能抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖。二甲雙胍抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用機(jī)制復(fù)雜多樣，且因細(xì)胞種類而異。然而迄今為止，尚未有文獻(xiàn)報道二甲雙胍對口腔鱗癌細(xì)胞生長的影響。本研究旨在通過一系列體內(nèi)和體外實驗，探討二甲雙胍對口腔鱗癌細(xì)胞的作用及其相關(guān)機(jī)理。
　　方法：通過細(xì)胞計數(shù)的方法檢測二甲雙胍處理對口腔鱗癌細(xì)胞數(shù)量的影響；通過細(xì)胞集落形成實驗檢測二甲雙胍對口腔鱗癌細(xì)胞體

2、外生長的抑制作用；通過流式細(xì)胞分析觀察二甲雙胍對口腔鱗癌細(xì)胞周期及凋亡的影響；通過蛋白免疫印跡的方法檢測有關(guān)信號通路上相關(guān)信號蛋白表達(dá)的變化；通過構(gòu)建口腔鱗癌裸鼠皮下移植瘤模型，并給荷瘤小鼠口服二甲雙胍，觀察其對口腔鱗癌細(xì)胞的體內(nèi)生長抑制作用。免疫組織化學(xué)染色及TUNEL染色分別被用于檢測荷瘤小鼠所荷腫瘤組織石蠟切片中cyclin D1的表達(dá)及細(xì)胞凋亡情況。通過流式細(xì)胞觀察二甲雙胍聯(lián)合化療藥物紫杉醇對口腔鱗癌細(xì)胞凋亡的作用。
　　

3、結(jié)果：二甲雙胍處理能夠明顯減少口腔鱗癌細(xì)胞CAL27、WSU-HN6和SCC25的細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞集落的形成，且這一效應(yīng)隨二甲雙胍劑量的增大和處理時間的延長表現(xiàn)更加明顯。流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示，二甲雙胍處理能顯著引起口腔鱗癌細(xì)胞周期發(fā)生G0/G1期阻滯。蛋白免疫印跡實驗表明，該現(xiàn)象的發(fā)生伴隨AMPK信號通路的激活及mTOR和S6激酶磷酸化的減少。二甲雙胍還引起相關(guān)周期蛋白如cyclin D1、CDK4、CDK6等表達(dá)下調(diào)和Rb蛋白磷酸化的下降

4、，但不影響細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子p21和p27的表達(dá)。此外，二甲雙胍可以明顯誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞發(fā)生凋亡，其機(jī)制可能與二甲雙胍誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞中促凋亡蛋白Bax的表達(dá)和抑制抗凋亡蛋白Bcl-xL和Bcl-2的表達(dá)有關(guān)。裸鼠口腔鱗癌移植瘤模型試驗結(jié)果表明，二甲雙胍同樣能通過減少周期蛋白cyclin D1的表達(dá)和誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞凋亡來抑制口腔鱗癌細(xì)胞的體內(nèi)生長。最后，二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇對口腔鱗癌細(xì)胞凋亡影響的研究表明，二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇