二甲雙胍對(duì)犬乳腺腫瘤細(xì)胞體外增殖抑制作用的影響.pdf

1、犬乳腺腫瘤作為危害母犬健康的常發(fā)的腫瘤性疾病之一，其受犬的年齡、品種、絕育狀態(tài)、繁殖情況以及遺傳因素等多種因素的影響。隨著犬作為伴侶動(dòng)物的常態(tài)化，犬飼養(yǎng)年限越來(lái)越長(zhǎng)，犬乳腺腫瘤的發(fā)病率在逐年升高，嚴(yán)重威脅犬的健康。犬乳腺腫瘤無(wú)論從臨床發(fā)病特點(diǎn)、組織病理學(xué)分型還是乳腺超聲、CT診斷上都與人類乳腺癌具有極高的相似性，可以作為人類乳腺癌研究的完美模型。因此，尋求安全而又有效的抗腫瘤藥物無(wú)論對(duì)人類還是犬都是十分必要和迫切的。二甲雙胍作為一種口服

2、降糖藥，主要用于Ⅱ型糖尿病的治療，對(duì)大量臨床案例的統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)二甲雙胍在降低糖尿病患者血糖的同時(shí)，可以顯著降低2型糖尿病患者罹患腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)和死亡率，對(duì)腫瘤起到一定的預(yù)防和治療作用。本研究以犬轉(zhuǎn)移乳腺腫瘤細(xì)胞系CHMm和原發(fā)腫瘤細(xì)胞系CHMp為模型，進(jìn)行二甲雙胍對(duì)犬乳腺腫瘤增殖抑制實(shí)驗(yàn)的研究，為二甲雙胍用于犬乳腺瘤的研究和治療提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)，主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
　　1.通過(guò)CCK-8法和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)不同

3、濃度二甲雙胍對(duì)犬乳腺腫瘤細(xì)胞增殖活性和克隆形成能力的影響。結(jié)果表明，二甲雙胍可顯著抑制犬乳腺腫瘤細(xì)胞CHMm和CHMp的增殖活性和克隆形成能力，并呈現(xiàn)一定的濃度和時(shí)間依賴性，根據(jù)對(duì)CHMm和CHMp細(xì)胞IC50的比較發(fā)現(xiàn):CHMm對(duì)二甲雙胍的敏感性更高。
　　2.通過(guò)Annexin-FITC和PI染色法，檢測(cè)二甲雙胍誘導(dǎo)犬乳腺腫瘤細(xì)胞凋亡情況，并通過(guò)western blot法檢測(cè)凋亡關(guān)鍵蛋白的表達(dá)。研究證實(shí)，隨著二甲雙胍作用濃度的

4、升高，可誘導(dǎo)犬乳腺腫瘤細(xì)胞CHMm發(fā)生細(xì)胞凋亡，并伴有凋亡核心蛋白caspase-3和PARP的活化切割片段的增加。在CHMp未觀察到誘導(dǎo)凋亡的發(fā)生，核心蛋白的活化片段量沒(méi)有發(fā)生顯著改變。
　　3.通過(guò)PI染色和流式細(xì)胞儀，檢測(cè)二甲雙胍對(duì)犬乳腺腫瘤細(xì)胞周期的影響，并通過(guò)western blot法檢測(cè)周期相關(guān)蛋白的變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍可將CHMm和CHMp細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期，并能上調(diào)p21、p27和下調(diào)Cyclin

5、D1、CDK4等G0/G1期關(guān)鍵蛋白的表達(dá)。
　　4.通過(guò)western blot法檢測(cè)二甲雙胍對(duì)犬乳腺腫瘤細(xì)胞內(nèi)AMPK/mTOR和PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路上關(guān)鍵蛋白的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)二甲雙胍可顯著激活CHMm細(xì)胞中的AMPK蛋白，并抑制PI3K、Akt及mTOR的表達(dá)。而在CHMp，經(jīng)二甲雙胍處理后，未觀察到AMPK的顯著性激活，但觀察到了PI3K、Akt及mTOR等相關(guān)蛋白的抑制現(xiàn)象。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了二