二甲雙胍激活AMPK、調控MMP-2,9和N-cadherin抑制食管鱗癌細胞侵襲轉移.pdf

1、背景及目的：
　　二甲雙胍是一種雙胍類口服降糖藥,是主要針對2型糖尿病治療的一線藥物。最近有研究表明，二甲雙胍可以影響腫瘤細胞的侵襲轉移，發(fā)揮抗腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用。既往研究認識其抗腫瘤作用的一個重要機制是激活腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）,誘導增殖抑制、細胞周期停滯、促進細胞凋亡；我們前期的研究也論證了二甲雙胍可以在體內外誘導食管癌細胞株增殖抑制、細胞周期停滯和促進細胞凋亡

2、。然而有關二甲雙胍對食管癌細胞是否具有抑制侵襲轉移的作用及相關機制研究至今仍鮮有報道。本研究將探討二甲雙胍對食管鱗癌EC109細胞侵襲轉移的影響及其作用機制，為臨床上二甲雙胍成為治療食管癌的新型抗腫瘤藥物提供新的理論基礎。
　　材料和方法：
　　1.用含10％胎牛血清，100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)人食管鱗癌細胞株EC109。
　　2.細胞接種于6cm培養(yǎng)皿中，待融合度至80%左右開始加

3、藥，用含不同濃度(0、5、10、20mM)二甲雙胍濃度培養(yǎng)基處理EC109細胞24h，以PBS處理細胞為對照，用transwell和BD Matrigel Invasion Chamber小室分別檢測二甲雙胍對EC109細胞遷移、侵襲的影響。
　　3.細胞接種于10cm培養(yǎng)皿中，待融合度至80%左右開始加藥，用含不同濃度(0、5、10、20mM)二甲雙胍濃度培養(yǎng)基處理EC109細胞24h，PBS處理組作為對照組，用Western

4、Blot檢測AMPK磷酸化程度。
　　4.細胞接種于6cm培養(yǎng)皿中，待融合度至80%左右開始加藥，用含10μM的Compound C培養(yǎng)基預處理8h,而后加或不加二甲雙胍（特定濃度20mM）作用至24h，PBS處理組作為對照組，用transwell和BD Matrigel Invasion Chamber小室分別檢測各組細胞遷移、侵襲的能力。
　　5.細胞接種于10cm培養(yǎng)皿中，待融合度至80%左右開始加藥，用含不同濃度(0

5、、5、10、20mM)二甲雙胍濃度培養(yǎng)基處理EC109細胞24h，PBS處理組作為對照組，用Western Blot檢測基質金屬蛋白酶MMP-2，9以及間質細胞表型蛋白N-cadherin的表達。
　　6.細胞接種于10cm培養(yǎng)皿中，待融合度至80%左右開始加藥，用含10μM的Compound C培養(yǎng)基預處理8h,而后加或不加二甲雙胍濃度20mM作用至24h，PBS處理組作為對照組，用Western Blot檢測AMPK磷酸化程度

6、、基質金屬蛋白酶MMP-2，MMP-9以及間質細胞表型蛋白N-cadherin的表達量。
　　7.實驗數(shù)據(jù)分析和處理：用GraphPad Prism5.0軟件，所有數(shù)據(jù)均使用單因素方差分析的Newman-Keul's檢驗進行統(tǒng)計學分析。
　　結果：
　　1.二甲雙胍抑制EC109細胞的遷移、侵襲能力。
　　2.二甲雙胍激活EC109細胞的AMPK磷酸化。
　　3.Compound C（AMPK抑制劑）減弱二