骨化三醇聯(lián)合順鉑對(duì)人子宮內(nèi)膜癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)及Skp2-p27表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　觀(guān)察骨化三醇、順鉑、骨化三醇聯(lián)合順鉑對(duì)人子宮內(nèi)膜癌HEC-1-A裸鼠移植瘤的抑制作用，分析藥物干預(yù)后各組移植瘤Skp2/p27的表達(dá)情況，進(jìn)一步探討各藥物在子宮內(nèi)膜癌中的作用機(jī)制。為骨化三醇可能作為一種輔助抗癌藥物治療子宮內(nèi)膜癌奠定理論基礎(chǔ)和提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1、培養(yǎng)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株HEC-1-A，將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HEC-1-A細(xì)胞株接種于SPF級(jí)雌性BALB/C裸鼠右側(cè)背部皮下，建立裸鼠

2、皮下移植瘤模型，待移植瘤長(zhǎng)成約7-8mm隨機(jī)分為四組，每組6只。
　　2、進(jìn)行藥物干預(yù):（1）對(duì)照組：0.25ml的生理鹽水加0.1ml無(wú)水乙醇;（2）骨化三醇組：0.05ug骨化三醇溶解在0.1ml無(wú)水乙醇，加0.25ml的生理鹽水;（3）順鉑組：50ugDDP溶解在0.25ml的生理鹽水0.1ml的無(wú)水乙醇;（4）聯(lián)合治療組：50ugDDP溶解在0.25ml的生理鹽水加0.05ug骨化三醇溶解在0.1ml的無(wú)水乙醇，上述藥物全

3、部腹腔內(nèi)注射，骨化三醇、無(wú)水乙醇、生理鹽水每周給藥5次，順鉑每周給藥1次，共給藥4周。
　　3、藥物干預(yù)期間觀(guān)察各組裸鼠飲食、活動(dòng)反應(yīng)及精神狀態(tài)等基本情況,每3天用電子天平測(cè)量裸鼠的質(zhì)量，進(jìn)行藥物毒性評(píng)價(jià)，每5天測(cè)量皮下腫瘤長(zhǎng)短徑計(jì)算腫瘤體積并繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線(xiàn)。藥物干預(yù)后處死裸鼠，將移植瘤完整取出，測(cè)量移植瘤的體積、瘤重，計(jì)算腫瘤的抑制率。
　　4、行蘇木素-伊紅染色（HE染色）觀(guān)察腫瘤形態(tài)學(xué)變化。
　　5、采用半定量

4、RT-PCR和Western blot分別檢測(cè)各組裸鼠移植瘤Skp2/p27的mRN A和蛋白表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1.藥物干預(yù)后，剝?nèi)∑は乱浦擦龊蠓謩e測(cè)量腫瘤體積并稱(chēng)瘤重。與對(duì)照組相比，骨化三醇組、順鉑組、聯(lián)合用藥組的瘤體積及瘤重明顯減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，聯(lián)合用藥組瘤體積及瘤重分別與骨化三醇組、順鉑組比較均明顯減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。骨化三醇組、順鉑組、聯(lián)合用藥組的抑瘤率分別為：44

5、.89％、52.39％、69.90％。
　　2.藥物干預(yù)后對(duì)比各組裸鼠凈體重：骨化三醇組與對(duì)照組差異無(wú)顯著性（P＞0.05），順鉑組和聯(lián)合用藥組與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），聯(lián)合用藥組和順鉑組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.HE染色結(jié)果顯示：對(duì)照組：腫瘤組織片狀生長(zhǎng)，腫瘤細(xì)胞密度高，明顯的核異型和活躍的核分裂相。骨化三醇組、順鉑組：腫瘤細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞密度和核分裂相明顯降低；骨化三醇聯(lián)合順鉑組：腫瘤

6、組織呈大片壞死，僅殘存少量腫瘤細(xì)胞及細(xì)胞碎片，伴少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　4.半定量RT-PCR及Western blot結(jié)果表明：與對(duì)照組相比，骨化三醇組、順鉑組、聯(lián)合用藥組Skp2 mRNA和蛋白表達(dá)均明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），聯(lián)合用藥組的Skp2 mRNA和蛋白表達(dá)顯著低于骨化三醇及順鉑單用藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;與對(duì)照組相比，骨化三醇組、順鉑組、聯(lián)合用藥組p27 mRNA表達(dá)無(wú)明顯改變，差異

7、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而p27蛋白表達(dá)均明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），聯(lián)合用藥組的p27蛋白表達(dá)顯著高于骨化三醇及順鉑單用藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　骨化三醇、順鉑、骨化三醇聯(lián)合順鉑對(duì)人子宮內(nèi)膜癌裸鼠移植瘤均有抑制作用，骨化三醇聯(lián)合順鉑對(duì)腫瘤抑制作用明顯強(qiáng)于各單用藥組。骨化三醇、順鉑二者均可能通過(guò)轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)Skp2基因表達(dá)，同時(shí)由于Skp2的減少增加P27蛋白穩(wěn)定性，減少