EGCG致人肺腺癌“血管正?；奔按翱谄诼?lián)合順鉑療效評估.pdf

1、目的：人肺腺癌作為一種實體腫瘤，腫瘤微血管與微環(huán)境對其增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移和進展起到了重要作用，同時也可被多種抗血管生成藥物所影響。研究證明，合理運用抗血管生成治療可使原來扭曲異常的腫瘤血管趨于正常，從而引起腫瘤血管和腫瘤微環(huán)境正?；?，進而更有效地輸送氧和藥物到達腫瘤細胞，以提高化療和放療的療效。正?；倪^程是短暫而可逆的，因此會形成特定的正?；皶r間窗”。它與使用的藥物及腫瘤類型、部位相關，在該時間窗內(nèi)聯(lián)合放化療可以起到協(xié)同作用。目前大量

2、臨床前和臨床研究都證實，多種直接或間接的抗血管生成治療能使腫瘤血管發(fā)生正?；?。表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigollatecatech in gallate，EGCG)是從綠茶中提取的主要天然成分，已被證明可以作用于多種血管生成因子，包括血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)，血小板源性生長因子(PDGF)和血管生成素(Angs)。因此，我們假設EGCG能夠引起人肺腺癌腫瘤微血管結(jié)構(gòu)與功能的改變并誘發(fā)“血管正常化”現(xiàn)象，并推測在EGCG引起的腫

3、瘤“血管正?；贝翱谄诼?lián)合化療可以起到抗腫瘤的協(xié)同作用。為證明該假設，我們建立了A549人肺腺癌細胞株裸鼠移植瘤模型，檢測經(jīng)EGCG處理后模型腫瘤組織在不同時間點其微血管結(jié)構(gòu)、功能以及微環(huán)境效應指標的變化，以及不同時間點聯(lián)合化療抗腫瘤療效，以證明該假設。
　　方法與結(jié)果：建立A549人肺腺癌細胞株移植瘤模型，隨機分成三組分別予以生理鹽水、EGCG、貝伐單抗（陽性對照）處理，分別檢測第0、2、4、6、9、12天6個時間點的以下指標。

4、⑴血管結(jié)構(gòu)改變指標:量子點雙標免疫熒光標記CD31-α-SMA觀察微血管結(jié)構(gòu)，并計數(shù)CD31-MVD（微血管密度）、α-SMA-MVD，和計算周細胞覆蓋率(MPI);量子點雙標免疫熒光標記CD31-CollagenⅣ觀察血管基底膜;透射電鏡評價內(nèi)皮細胞、周細胞的形態(tài)與連接、基底膜的完整性以及腫瘤細胞與血管的關系;⑵血管功能改變指標:量子點雙標免疫熒光標記CD31-1ectin評價血管灌注功能;Evans blue灌注法評價血管滲透性;⑶

5、腫瘤微環(huán)境效應改變指標:組織間液壓(IFP)、組織氧分壓(PO2)測定;免疫組化法標記Pimonidazole檢測腫瘤組織乏氧水平。以上結(jié)果顯示EGCG及貝伐單抗處理A549荷瘤裸鼠后均可引起腫瘤組織CD31-MVD的持續(xù)下降，MPI逐漸上升，血管灌注功能及滲透性一過性升高，腫瘤組織IFP一過性下降、PO2一過性升高，但EGCG處理組微血管基底膜出現(xiàn)變薄且規(guī)律分布，而貝伐單抗組血管基底膜標記Collagen(IV)表達量僅出現(xiàn)下降趨勢，

6、無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。根據(jù)以上改變可以明確觀察到EGCG引起了人肺腺癌移植瘤腫瘤血管正常化，并且以上相應血管指標一過性改變的窗口約位于第4-9天，而貝伐單抗的窗口期約位于第2-6天。我們進一步檢測予以不同EGCG聯(lián)合順鉑給藥方式時腫瘤組織內(nèi)順鉑的濃度，分別分為d0（窗口期前）天予以全量順鉑(4mg/kg)單次腹腔注射給藥（A組），d5（窗口期）予以半量順鉑(2mg/kg)單次腹腔注射給藥（B組），d5（窗口期）予以全量順鉑(4m

7、g/kg)單次腹腔注射給藥（C組），以（石墨爐）原子吸收光譜法檢測腫瘤組織中順鉑濃度。結(jié)果顯示C組移植瘤組織內(nèi)濃度明顯高于另三組（1.8μg/gm組織，P＜0.001），差異有統(tǒng)計學意義。B組所達順鉑組織濃度與A組近似（分別為1.0μg/gm組織，0.8μg/gm組織），差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。為明確在以上窗口期聯(lián)合化療是否可以影響人肺腺癌腫瘤對化療的敏感性并且產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤作用，我們將A549荷瘤裸鼠分別予以生理鹽水（A組）

8、、順鉑（B組）、EGCG溶液（C組）、EGCG+第0天聯(lián)合順鉑（D1組）和EGCG+第5天（窗口期內(nèi)）聯(lián)合順鉑處理（D2組），通過記錄各組瘤體長至1250mm3所需平均天數(shù)得出腫瘤生長延遲天數(shù)，并通過計算抑瘤率觀察腫瘤生長速度。結(jié)果顯示：各組的腫瘤生長延遲天數(shù)分別為:6.3±1.51天，7.5±1.57天，8.3+1.79天，12.1±1.35天和15.4±1.99天，將A、B、C、D2四組腫瘤生長延遲天數(shù)進行統(tǒng)計學分析提示EGCG與順

9、鉑抗腫瘤治療有協(xié)同效應(P＜0.01)；聯(lián)合治療組(D1、D2)移植瘤生長速度較另三組明顯較慢(抑瘤率分別為5.53％、12.82％、40.18％、56.88％，p＜0.001)，差異有統(tǒng)計學意義，且在窗口期聯(lián)合化療的D2組腫瘤生長速度明顯緩于在窗口期前聯(lián)合化療的D1組(P＜0.01)。
　　結(jié)論：EGCG可以引起人肺腺癌移植瘤腫瘤血管正?；?，其正?；翱谄诩s位于第4-9天，在該窗口期內(nèi)聯(lián)合化療可以使腫瘤組織局部化療濃度升高，并與