低分子肝素聯(lián)合順鉑對人肺腺癌A549細(xì)胞的體外實驗和機(jī)制研究.pdf

1、目的：不同濃度低分子肝素（low molecular weight heparin，LMWH）單用或與順鉑（Cisplatin）聯(lián)合處理人肺腺癌A549細(xì)胞，觀察LMWH對A549細(xì)胞體外作用的影響，進(jìn)一步闡明 LMWH抑制腫瘤細(xì)胞增殖、影響細(xì)胞周期以及抑制腫瘤血管生成的可能機(jī)制，并探討其與Cisplatin的協(xié)同作用。
　　方法：
　　1.體外培養(yǎng)人肺腺癌細(xì)胞 A549，采用四甲基偶氮唑藍(lán)(tetrzolium-based

2、 colorimetric assay，MTT)比色法檢測LMWH和Cisplatin單用及兩者聯(lián)合使用對人肺腺癌細(xì)胞的生長抑制作用；
　　2.應(yīng)用流式細(xì)胞儀分析LMWH和Cisplatin對A549細(xì)胞的細(xì)胞周期作用；
　　3.采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（revers transcription PCR， RT-PCR）半定量檢測LMWH處理細(xì)胞24h和48h后血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial gr

3、owth factor VEGF） mRNA的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1. MTT法檢測細(xì)胞生長抑制率的結(jié)果顯示：不同濃度的LMWH(5IU/ml，15IU/ml，50IU/ml,150IU/ml)對A549細(xì)胞均具有增殖抑制作用。隨著不同藥物濃度作用時間的延長，24至48h后，與對照組相比，各處理組OD值均有不同程度的下降，具有顯著差異（P<0.05），各處理組間比較，亦有顯著差異（P<0.05）。且隨LMWH處理濃度

4、的增大、作用時間的延長，OD值逐漸下降，即LMWH對A549細(xì)胞的增殖抑制作用呈明顯的劑量－效應(yīng)和時間－效應(yīng)依賴關(guān)系。其中， LMWH(50IU/ml，150IU/ml)與 Cisplatin單獨(dú)使用及兩者聯(lián)合應(yīng)用與對照組比較均有差異（P<0.05）。
　　2.流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期分布顯示，肺腺癌 A549細(xì)胞處理48h后，和對照組相比，各實驗組 G1/G0期細(xì)胞比例升高，S期細(xì)胞比例降低，其中 LMWH和Cisplatin聯(lián)用

5、組與其它實驗組和對照組相比，G0/G1期細(xì)胞增多、誘導(dǎo)凋亡更加顯著。即LMWH和Cisplatin聯(lián)合后阻滯A549細(xì)胞于G1/G0期,使進(jìn)入S期的細(xì)胞減少。具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；
　　3. RT-PCR分析細(xì)胞 VEGF mRNA表達(dá)水平,結(jié)果顯示：5IU/ml,15IU/ml,50IU/ml,150IU/ml LMWH分別作用A549細(xì)胞24h和48h后，VEGF mRNA水平的表達(dá)分別是隨藥物濃度加大和時間的

6、延長而逐漸減弱，有明顯的濃度和時間依賴性。差異具有顯著性（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1. LMWH能抑制肺癌細(xì)胞A549的增殖,且呈時間-劑量依賴性，與Cisplatin聯(lián)合后抗增殖作用增強(qiáng)；
　　2. LMWH阻滯人肺腺癌細(xì)胞A549于G0/G1期，Cisplatin干擾DNA的合成，兩者聯(lián)合作用增強(qiáng)；
　　3. LMWH可以通過下調(diào)細(xì)胞VEGF mRNA的表達(dá)水平，抑制腫瘤血管生成，從而抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。