BSO介導氧化應激聯(lián)合順鉑促人肺腺癌A549干細胞球凋亡的研究.pdf

1、背景:
　　當前,非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)死亡率呈現(xiàn)逐年遞增趨勢,居惡性腫瘤死因之首。但由于肺癌腫瘤組織中存有高耐藥導致順鉑(diamminedichloroplatinum,DDP)化療失敗,成為臨床迫切解決的課題。
　　“腫瘤干細胞假說”理論認為腫瘤干細胞(cancer stem cells,CSCs)是腫瘤組織中的極少數(shù)具有干細胞特性的細胞群體,尚未充分分化的原始

2、細胞,具有自我更新和多向分化潛能。單個CSCs即具有致瘤性,可能是腫瘤再發(fā)的始動細胞。本課題前期研究已成功分離出肺腺癌CSCs,相比非CSCs具有低線粒體DNA拷貝數(shù)、胞內(nèi)低活性氧(reactive oxygen species,ROS)濃度、低葡萄糖及低耗氧等獨特的能量代謝特征,同時認為維持CSCs胞內(nèi)低ROS濃度與其自我更新、多向分化及高致瘤性密切相關。鑒于ROS在腫瘤放療促凋亡的重要作用,我們認為CSCs胞內(nèi)ROS濃度的高低亦可影

3、響腫瘤化療藥物的療效,促CSCs胞內(nèi)ROS蓄積的聯(lián)合化療或可成為腫瘤綜合治療新策略。
　　因此,本研究擬人肺腺癌A549細胞經(jīng)無血清培養(yǎng)基(serum-free medium, SFM)培養(yǎng)A549干細胞球,探討A549細胞與A549干細胞球間的谷胱甘肽-硫-轉移酶π(glutathione-S-transferase-π,GST-π)表達及胞內(nèi)ROS濃度差異情況;同時針對該兩種細胞分別以空白對照組、順鉑組、GST-π抑制劑丁硫氨

4、酸-亞砜亞胺(DL-buthionine-S,R-sulfoximine,BSO)聯(lián)合DDP組及N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)聯(lián)合DDP組干預,并檢測各組與之對應的ROS濃度及凋亡率。
　　目的:
　　1、比較A549單細胞克隆不同形態(tài)的胞內(nèi)ROS濃度。
　　2、比較A549細胞和A549干細胞球不同藥物組合干預后GST-π的表達、胞內(nèi)ROS濃度及凋亡率的差異,同時探討三者的相關性。

5、
　　方法:
　　1、采用熒光顯微鏡檢測A549單細胞克隆不同形態(tài)的胞內(nèi)ROS濃度。
　　2、通過Western Blot檢測A549細胞和A549干細胞球不同藥物組合干預24h后GST-π蛋白表達水平。
　　3、利用流式細胞術檢測A549細胞和A549干細胞球不同藥物組合干預24h后胞內(nèi)ROS濃度及凋亡率。
　　結果:
　　1、A549緊密型克隆細胞胞內(nèi)ROS濃度明顯低于松散型(24.13±1.79

6、 vs77.89±6.71 P<0.01)。
　　2、A549干細胞球較A549細胞高表達GST-π蛋白(1.45±0.07 vs1.25±0.06 P<0.05),同時維持胞內(nèi)低ROS濃度(272.67±16.04 vs326.33±12.34 P<0.01);順鉑干預后前者胞內(nèi)ROS濃度上升幅度較后者小(585±12.12 vs768.67±9.02 P<0.01),凋亡增加幅度亦較后者小(13.74±1.51 vs23.23

7、±1.08 P<0.01)。
　　3、A549細胞及A549干細胞球經(jīng)過NAC聯(lián)合順鉑與單用順鉑干預后相比,兩種細胞均表現(xiàn)胞內(nèi) ROS濃度顯著下降( A549細胞547.67±9.07 vs768.67±9.02 P<0.01,A549干細胞球452.33±16.16 vs585.00±12.12 P<0.01),凋亡亦較單用順鉑減少(A549細胞12.47±1.50 vs23.23±1.08 P<0.01,A549干細胞球8.4

8、3±1.10 vs13.74±1.51 P<0.01)。
　　4、A549干細胞球及A549細胞經(jīng)過BSO聯(lián)合順鉑干預后相比,前者更低表達GST-π蛋白(0.51±0.05 vs0.83±0.05 P<0.05)、胞內(nèi)ROS濃度明顯蓄積(1651.00±28.62 vs1486.67±10.02 P<0.01)、并伴有凋亡增幅明顯(34.20±2.01 vs29.05±1.08 P<0.01)。
　　結論:
　　1、