臍血干細胞與胃黏膜上皮細胞融合的體外實驗研究.pdf

1、目的：細胞融合在腫瘤發(fā)生和進展中的作用值得重視，融合可能誘導(dǎo)產(chǎn)生腫瘤干細胞。本研究將分離胃粘膜上皮細胞及臍血CD133+細胞，探索胃粘膜上皮細胞與CD133+細胞融合的條件，研究細胞融合參與胃癌發(fā)生的可能，探索腫瘤干細胞的起源。
　　 方法：
　　 1）采集健康孕婦所生胎兒臍帶血，免疫磁珠法分離臍血干細胞。
　　 2）手術(shù)采集胃粘膜上皮細胞，比較單純化學(xué)消化方法與機械和化學(xué)方法相結(jié)合消化方法對胃粘膜上皮細胞的影響

2、。
　　 3）上皮特異性角蛋白18免疫熒光染色對胃粘膜上皮細胞進行鑒定。
　　 4）PKH26和PKH67分別標記CD133干細胞和胃粘膜上皮細胞，聚乙二醇介導(dǎo)臍血干細胞與正常胃粘膜上皮細胞體外融合。
　　 5）融合細胞培養(yǎng)，顯微鏡觀察融合細胞形態(tài)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.兩種方法消化胃粘膜上皮細胞，臺盼藍染色計算細胞活力；單純化學(xué)消化方法為93.21±3.35％、機械與化學(xué)相結(jié)合的消化方法

3、為86.07±4.12％，免疫熒光方法檢測培養(yǎng)細胞cytokeratin18陽性表達率分別為82.76±5.47％、94.19±2.62％，體外細胞培養(yǎng)中位生存期分別為7天、19天。
　　 2.流式細胞儀檢測免疫磁珠分離后臍血單個核細胞CD133陽性率為96.48±2.13％。
　　 3.流式細胞儀檢測分析細胞融合率可達18.14±3.27％。
　　 4.融合12小時后可見部分細胞聚集，3周后可見部分細胞呈克隆團

4、狀增值。
　　 5.BaLb/C小鼠胃粘膜上皮細胞與骨髓CD117+干細胞融合后5周后可見細胞發(fā)生形態(tài)學(xué)變化，形成類似于成纖維細胞狀的梭形細胞。
　　 結(jié)論：
　　 （1）采用機械與化學(xué)相結(jié)合的兩步消化方法較單純化學(xué)方法所得胃粘膜上皮細胞純度較高，且體外培養(yǎng)時間明顯延長。
　　 （2）采用密度梯度離心，CD133免疫磁珠成功分離CD133+細胞。
　　 （3）50％的PEG可刺激細胞融合，融合率為