臍血間充質(zhì)干細胞聯(lián)合細胞因子支持人臍血單個核細胞體外擴增的探討.pdf

1、臍血作為一種造血干細胞資源越來越受到廣泛重視，但由于單份臍血中造血干細胞數(shù)量不足，不能滿足大多數(shù)成人和高體重兒童造血干細胞移植重建造血及免疫功能的需要，故限制了其廣泛應用。體外擴增雖然可以增加造血細胞數(shù)量，但可能導致造血干細胞分化并降低其歸巢和長期造血重建能力，因此提高臍血造血干細胞體外擴增質(zhì)量仍是臍血移植中亟待解決的問題。 間充質(zhì)干細胞作為造血微環(huán)境主要細胞成分基質(zhì)細胞的前體細胞，可以分泌與造血干細胞生長發(fā)育相關(guān)的黏附分子、細

2、胞外基質(zhì)和多種細胞因子，為造血干細胞體外擴增提供適宜的微環(huán)境。隨著培養(yǎng)技術(shù)的提高，臍血間充質(zhì)干細胞有著與其他來源的間充質(zhì)干細胞所無法比擬的優(yōu)勢。本實驗研究臍血問充質(zhì)干細胞對人臍血單個核細胞體外擴增的支持作用。 目的:探討臍血來源間充質(zhì)干細胞（UCB-MSCs）體外分離、培養(yǎng)和初步鑒定的方法，以及UCB-MSCs聯(lián)合外源性細胞因子對人臍血單個核細胞（UCB-MNCs）體外擴增的支持作用和最佳收獲時間，為配合造血干細胞移植的臨床應用

3、提供實驗方法。 方法:用羥乙基淀粉（HES）和人淋巴細胞分離液（Ficoll-Hypaque）以密度梯度離心法分離臍血單個核細胞，采用貼壁篩選法以MesencultTM專用培養(yǎng)基培養(yǎng)出臍血間充質(zhì)干細胞，并通過流式細胞儀檢測其細胞表面抗原。將新鮮臍血標本分離出的臍血單個核細胞接種于無血清培養(yǎng)體系（Stem spanTM）中培養(yǎng)18天，實驗分三組，A組：為空白對照組（培養(yǎng)體系中無外源性細胞因子和UCB-MSCs滋養(yǎng)層）；B組：為因子

4、組（培養(yǎng)體系中有外源性細胞因子但無UCB-MSCs滋養(yǎng)層）；C組：為實驗組（培養(yǎng)體系中既有外源性細胞因子又有UCB-MSCs滋養(yǎng)層）。在第0、7、10、14及18天檢測有核細胞總數(shù)（MNCs）、CD34+細胞數(shù)、CD133+細胞數(shù)、集落形成單位數(shù)（CFU）和細胞在周期（G2+M+S期）含量的變化。 結(jié)果:①從臍血中分離、培養(yǎng)的出間充質(zhì)干細胞，穩(wěn)定表達CD29、CD105和CD44，不表達CD34和CD133。②在體外培養(yǎng)過程中，

5、外源性細胞因子及UCB-MSCs均對臍血單個核細胞的擴增起支持作用，但以UCB-MSCs聯(lián)合外源性細胞因子組效果最好，該組各項指標在同一時間點較其它兩組高，有統(tǒng)計學意義，且維持造血至少達18天。③以UCB-MSCs聯(lián)合外源性細胞因子對臍血單個核細胞擴增，第10天上述各項指標達到最高峰，有統(tǒng)計學意義。 結(jié)論:①采用密度梯度離心聯(lián)合貼壁篩選法并通過流式細胞檢測技術(shù)，可以成功地實現(xiàn)從臍血中分離、培養(yǎng)出問充質(zhì)干細胞，并完成其細胞表型的初