胰腺導(dǎo)管干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞融合參與胰腺癌起源的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文胰腺導(dǎo)管干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞融合參與胰腺癌起源的實(shí)驗(yàn)研究姓名：勾善淼申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)（普外）指導(dǎo)教師：王春友20090501華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文 平檢測(cè)、體外增殖能力測(cè)定、向胰島 β 細(xì)胞和胰腺腺泡細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力測(cè)定。 全骨髓培養(yǎng)法獲取小鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞， 通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)，繪制細(xì)胞增殖曲線評(píng)

2、價(jià)細(xì)胞增殖能力，通過(guò)在成骨、成軟骨和成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞分化。 PEG 化學(xué)誘導(dǎo) C57BL/6J- Tg(pPGKneobpA)3Ems 小鼠胰腺導(dǎo)管細(xì)胞與 GFP 轉(zhuǎn)染的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的融合，G418 篩選與流式分選純化融合細(xì)胞，繪制融合細(xì)胞增殖曲線檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)融合細(xì)胞錨定依賴性，Transwell實(shí)驗(yàn)鑒定融合細(xì)胞移動(dòng)與侵襲能力；體外長(zhǎng)期培養(yǎng)融合細(xì)胞，并以

3、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和胰腺導(dǎo)管細(xì)胞為對(duì)照，光學(xué)顯微鏡下尋找并擴(kuò)增惡性轉(zhuǎn)化克隆；繪制細(xì)胞增殖曲線評(píng)價(jià)惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞增殖能力，軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞錨定依賴性，流式細(xì)胞術(shù)分析惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞染色體倍數(shù)， 核型分析尋找非整倍體細(xì)胞， Transwell 實(shí)驗(yàn)鑒定惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞的移動(dòng)與侵襲能力， NOD/SCID 鼠成瘤實(shí)驗(yàn)鑒定惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞的成瘤能力。 對(duì)比惡性轉(zhuǎn)化的融合細(xì)胞與胰腺癌干細(xì)胞的生物學(xué)特性， 探討胰腺癌干細(xì)胞的可能起源。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 PANC- 1胰腺癌細(xì)胞中存在腫瘤干細(xì)胞亞群， 這群細(xì)胞所占比例為9.83％±2.61％。胰腺癌腫瘤干細(xì)胞中 98.10%±1.26%能排出 Hoechst 33342 染料， 裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)顯示 5×105 細(xì)胞即可形成腫瘤。此群細(xì)胞高表達(dá) CD44、Sca- 1 和 ESA，CD34 表達(dá)水平較低，但遠(yuǎn)高于一般胰腺癌細(xì)胞，c- met 表達(dá)水平與一般胰腺癌細(xì)胞無(wú)顯著差異。 部分胰腺導(dǎo)管細(xì)胞

5、表達(dá) CD24，CD24 ＋細(xì)胞主要分布于小葉間胰管上皮和小葉內(nèi)胰管上皮，CD24 ＋細(xì)胞主要分布于主胰管上皮和閏管上皮。CD24- 胰腺導(dǎo)管細(xì)胞較CD24 ＋導(dǎo)管細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖能力，在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)后可經(jīng) bFGF 誘導(dǎo)分化為胰島 β 細(xì)胞。 聯(lián)合 G418 篩選與流式細(xì)胞分選 PEG 融合細(xì)胞可獲得純化的融合細(xì)胞。 胰腺導(dǎo)管細(xì)胞在與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞融合后部分融合細(xì)胞喪失錨定依賴性。 經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期體外培養(yǎng)后，融合細(xì)胞易發(fā)生染色體與