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文檔簡介
1、目的:干細胞移植是治療椎間盤退變的新方向，本研究利用transwell共培養(yǎng)系統(tǒng)比較共培養(yǎng)誘導后SD大鼠骨髓間充質干細胞和脂肪間充質干細胞向類纖維環(huán)細胞的分化能力。
方法:將骨髓間充質干細胞和脂肪間充質干細胞分別與纖維環(huán)細胞作直接接觸共培養(yǎng)，在共培養(yǎng)0天、7天、14天、21天后檢測。利用掃描電鏡觀察共培養(yǎng)細胞間的直接接觸，共培養(yǎng)誘導后用免疫組化檢測干細胞Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原表達，利用阿利辛染色及DMMB比色法檢測干細胞氨基聚糖分
2、泌量。最后用qRT-PCR測定干細胞CollagenⅠ、CollagenⅡ、Aggrecan基因表達。
結果:阿利辛染色及免疫組化染色顯示兩種干細胞在共培養(yǎng)后均能分泌Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原及蛋白多糖多聚體等纖維環(huán)細胞功能蛋白，且共培養(yǎng)兩周后上述組織學染色顯示骨髓間充質干細胞分泌較多的Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原及蛋白多糖多聚體。qRT-PCR檢測結果表明骨髓間充質干細胞在共培養(yǎng)14天起出現(xiàn)CollagenⅠ、CollagenⅡ基因表達量顯著
3、提高，而脂肪間充質干細胞在共培養(yǎng)21天后出現(xiàn)CollagenⅠ、CollagenⅡ基因表達量顯著提高;對于Aggrecan基因表達，骨髓間充質干細胞從共培養(yǎng)7天起顯著提升，而脂肪間充質干細胞在共培養(yǎng)14天后Aggrecan基因表達顯著提升。另外從細胞形態(tài)上講，共培養(yǎng)誘導后骨髓間充質干細胞由針尖樣轉變?yōu)槿切危愃朴诶w維環(huán)細胞。
結論:本研究通過組織學染色及qRT-PCR等技術成功證實經(jīng)直接接觸共培養(yǎng)誘導后后骨髓間充質干細胞和脂
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