人纖維環(huán)細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞Transwell共培養(yǎng)研究.pdf

1、背景：椎間盤(pán)退變常引起頸肩痛和腰腿痛。常用的手術(shù)治療方法雖可提供良好的短期療效，但手術(shù)改變了脊柱的生物力學(xué)，導(dǎo)致相鄰椎間盤(pán)的進(jìn)一步退變。因此，尋找可在椎間盤(pán)退變?cè)缙谶M(jìn)行干預(yù)并維持脊柱生物力學(xué)的組織工程修復(fù)方法，成為目前研究的焦點(diǎn)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)更是成為研究椎間盤(pán)退變修復(fù)的干細(xì)胞治療的熱點(diǎn)。纖維環(huán)(AF)是椎間盤(pán)的重要組成結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)和功能的完整性在椎間盤(pán)退變防治中有著重要意義。
　　 目的：探討人的纖維環(huán)(AF)

2、細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)在Transwell共培養(yǎng)后，對(duì)AF細(xì)胞的細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)合成的影響，以及BMSCs是否具有向AF細(xì)胞分化的能力。
　　 方法：分別對(duì)5例年齡在40歲以下脊柱手術(shù)病人的纖維環(huán)組織和骨髓標(biāo)本進(jìn)行分離、培養(yǎng)AF細(xì)胞和BMSCS，分別吸取第三代的AF細(xì)胞和BMSCs，按1∶1的細(xì)胞比例分別植于Transwell共培養(yǎng)系統(tǒng)中，下室植入BMSCs，上室植入AF細(xì)胞。并且建立3個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)組，即BMSC

3、s與AF細(xì)胞共培養(yǎng)組（實(shí)驗(yàn)組），BMSCs單獨(dú)培養(yǎng)組和AF細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)組作為對(duì)照組。培養(yǎng)3周后，運(yùn)用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)變化；分別用HE染色、Ⅰ型膠原免疫組化染色和流式細(xì)胞儀對(duì)兩種細(xì)胞鑒定；運(yùn)用熒光定量PCR法檢測(cè)各細(xì)胞培養(yǎng)組蛋白聚糖Aggrecan、Ⅰ型膠原蛋白mRNA及Sox9的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：兩種細(xì)胞在分離培養(yǎng)后經(jīng)過(guò)鑒定確定為AF細(xì)胞和BMSCs。在倒置相差顯微鏡觀察下，共培養(yǎng)組中AF細(xì)胞和BMSCs在細(xì)胞