共培養(yǎng)法誘導骨髓間充質干細胞向毛細胞樣細胞分化的實驗研究.pdf

1、目的:建立體外共培養(yǎng)法定向誘導骨髓間充質干細胞（BMSCs）向毛細胞樣細胞分化的方法。
　　 方法：采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)小鼠骨髓中的間充質干細胞。并傳代和純化。第三代用熒光免疫組化法檢測細胞表面標志蛋白CD44、CD34、CD106、Vimentin的表達。采新生小鼠腦膠質細胞 (ASTs) 體外培育到第三代，用熒光免疫組化法檢測膠質細胞表達標志蛋白GFAP的表達。采新生小鼠耳基底膜細胞（BAMCs）體外擴增培育至第三代備用

2、。取第三代的BMSCs與ASTs共培養(yǎng)，并聯(lián)合RA （DMEM/F12/RA+10％FBS）誘導培養(yǎng)7天,使BMSCs向神經(jīng)前體細胞分化。誘導后的細胞用熒光免疫組化法檢測神經(jīng)前體標志蛋白(Nestin)的表達情況。誘導后所得的細胞再與BAMCs共培養(yǎng)于DMEM/F12+10％FBS中14天,誘導其向毛細胞樣細胞分化。并用熒光免疫組化法檢測聽毛細胞標記物（Math1和MyosinVIIa）蛋白的表達。采用RT-PCR法檢測Math1和My

3、osinVIIa mRNA的表達。
　　 結果:經(jīng)ASTs共培養(yǎng)并聯(lián)合RA誘導后的BMSCs表達神經(jīng)前體細胞特異性蛋白Nestin。此種神經(jīng)前體細胞與BAMCs共培養(yǎng)后，部份細胞表達毛細胞特異性標志蛋白Math1、MyosinVIIa mRNA和蛋白。
　　 結論：BMSCs經(jīng)與ASTs共培養(yǎng)并聯(lián)合RA誘導后，所得細胞再與BAMCs共培養(yǎng)，能誘導分化出部份表達Math1和MyosinVIIa mRNA和蛋白的毛細胞樣細胞