中藥復(fù)方誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:本研究旨在通過補(bǔ)腎填精的中藥復(fù)方（左歸丸）誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化，并通過免疫組化鑒定誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞為神經(jīng)元樣細(xì)胞，從而為“腎藏精、生髓”的傳統(tǒng)中醫(yī)理論提供相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　實(shí)驗(yàn)一利用全骨髓貼壁法分離大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并在體外擴(kuò)增、純化，倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)，利用左歸丸藥液對(duì)分離后的細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化，通過阿利新藍(lán)染色、改良鈣鈷法堿性磷酸酶染色、神經(jīng)元特異性烯醇化酶免疫組織化學(xué)染色以鑒定分化后的細(xì)

2、胞是否為成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、神經(jīng)元樣細(xì)胞。
　　實(shí)驗(yàn)二利用全骨髓貼壁法分離大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，利用左歸丸拆藥后的各組藥液分別對(duì)獲得的細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化，并進(jìn)行神經(jīng)元特異性烯醇化酶免疫組織化學(xué)染色，計(jì)其陽性表達(dá)的細(xì)胞。
　　結(jié)果:
　　實(shí)驗(yàn)一顯示，分離純化后的細(xì)胞，經(jīng)倒置顯微鏡觀察其形態(tài)，再左歸丸藥液誘導(dǎo)分化后，經(jīng)阿利新藍(lán)染色、改良鈣鈷法磷酸酶染色、神經(jīng)元特異性烯醇化酶免疫組織化學(xué)染色，證明獲得的細(xì)胞向軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞

3、、神經(jīng)元樣細(xì)胞進(jìn)行了分化，獲得的細(xì)胞的形態(tài)符合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)表現(xiàn)。
　　實(shí)驗(yàn)二將獲得的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，用左歸丸拆藥后的各組藥液對(duì)其進(jìn)行誘導(dǎo)分化，經(jīng)NSE染色后計(jì)陽性表達(dá)細(xì)胞，結(jié)果顯示撤出熟地NSE表達(dá)明顯增高；撤除枸杞后陽性表達(dá)率下降最多，其次是山茱萸、山藥、牛膝；撤出菟絲子不影響該酶的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　實(shí)驗(yàn)一：采用全骨髓貼壁法獲得的細(xì)胞為大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；中藥復(fù)方左歸丸對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞有多向