大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)及體外誘導(dǎo)向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化的研究.pdf

1、目的:建立SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)體外培養(yǎng)體系，誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，篩選較好的體外誘導(dǎo)方法，為下一步內(nèi)耳移植實驗提供前期研究基礎(chǔ)。
　　方法:1.BMSCs培養(yǎng):主要采用全骨髓直接貼壁法培養(yǎng)BMSCs并傳代，取P3代行流式細(xì)胞儀檢測BMSCs表面標(biāo)志CD29，CD90及造血細(xì)胞表面抗原CD45的表達。2.取P4代BMSCs，由堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)預(yù)誘導(dǎo)24h后，分別加入:A組誘導(dǎo)劑:神經(jīng)營養(yǎng)素3(N

2、T-3)，維甲酸(RA);B組誘導(dǎo)劑:β-硫基乙醇(BME)。誘導(dǎo)1h，5h，24h，7d，14d，21d后，采用細(xì)胞免疫熒光方法鑒定，檢測成熟神經(jīng)元標(biāo)志物神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)的表達情況，觀察兩組是否有染色陽性的神經(jīng)元樣細(xì)胞及比較陽性率的高低。
　　結(jié)果:1.全骨髓貼壁篩選法簡便，所獲得的細(xì)胞數(shù)量多，增殖分化快。2.流式細(xì)胞儀檢測BMSCs表達CD90、CD29;不表達CD45，結(jié)合細(xì)胞形態(tài)分析，符合BMSCs的特征。3