大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的研究.pdf

1、背景：在缺血性心臟病的治療中,心肌再生一直是國(guó)內(nèi)外研究的焦點(diǎn)。骨髓間充干細(xì)胞(BMSCs)易于獲取,在一定條件下,能在體外大量擴(kuò)增,同時(shí)自體移植不存在倫理爭(zhēng)議,也沒有免疫排斥反應(yīng)且在體內(nèi)外不同誘導(dǎo)條件下可分化為內(nèi)皮細(xì)胞、成骨細(xì)胞、心肌細(xì)胞等優(yōu)勢(shì)[1-4],備受關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn),BMSCs在體內(nèi)、體外誘導(dǎo)環(huán)境下,均可分化為心肌樣細(xì)胞,但其機(jī)制尚不明確[5-7]。本實(shí)驗(yàn)將大鼠BMSCs分別用5-氮胞苷(5-Aza)誘導(dǎo)和與心肌細(xì)胞(CM)共培

2、養(yǎng)的方法進(jìn)行體外誘導(dǎo),觀察大鼠BMSCs誘導(dǎo)分化后的生長(zhǎng)情況和形態(tài)變化,及其在不同時(shí)間段分化為心肌樣細(xì)胞的能力及表達(dá)心肌樣細(xì)胞特異性標(biāo)記物cTnI、Cx43和心肌特異性轉(zhuǎn)錄因子GATA-4的差別,為今后進(jìn)一步研究BMSCs分化機(jī)制以及應(yīng)用于臨床治療缺血性心臟病提供一定的理論依據(jù)和技術(shù)手段。
　　目的：研究體外不同誘導(dǎo)條件下大鼠BMSCs在不同時(shí)間段分化為心肌樣細(xì)胞的能力及表達(dá)心肌樣細(xì)胞特異性標(biāo)記物的差別。
　　方法：分離培養(yǎng)

3、SD大鼠BMSCs和SD乳鼠CM并鑒定。取第3代BMSCs分別進(jìn)行5-氮胞苷(5-Aza)誘導(dǎo)、與CM共培養(yǎng)及單獨(dú)培養(yǎng)。分別于第2、4、6、8、10周使用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和形態(tài)變化,RT-PCR檢測(cè)每組心肌特異性基因cTnI、Cx43和心肌特異性轉(zhuǎn)錄因子GATA-4。
　　結(jié)果：?jiǎn)为?dú)培養(yǎng)組未見有搏動(dòng)細(xì)胞,cTnI、Cx43和GATA-4基因表達(dá)陰性;5-aza誘導(dǎo)組于第2周時(shí)細(xì)胞呈梭形且排列方向趨于一致,未見有搏動(dòng)細(xì)胞,

4、cTnI、Cx43基因表達(dá)第8周達(dá)到高峰,GATA-4基因表達(dá)第4周達(dá)高峰;共培養(yǎng)組細(xì)胞多為梭形,成肌性排列,可見搏動(dòng)頻率不一致的搏動(dòng)細(xì)胞,cTnI、Cx43基因表達(dá)于第2-8周表達(dá)逐漸增加,GATA-4基因表達(dá)第6周達(dá)高峰;相同時(shí)段內(nèi),共培養(yǎng)組的GATA-4、cTnI、Cx43基因表達(dá)高于5-Aza誘導(dǎo)組(P<0.05)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)三組細(xì)胞崩解死亡的細(xì)胞數(shù)開始增多,培養(yǎng)12周后尤其明顯。
　　結(jié)論：BMSCs經(jīng)5-Aza