骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與髓核細(xì)胞共培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景介紹：椎間盤退變(intervertebral disc degeneration，IDD)導(dǎo)致的腰椎間盤突出癥和慢性腰腿痛是骨科常見疾患，其具體機(jī)制不明。臨床上常采用手術(shù)切除突出椎間盤組織或行椎體間融合術(shù)等以緩解癥狀，但術(shù)中不可避免地會(huì)破壞椎間盤和椎體附件的正常結(jié)構(gòu)，引起繼發(fā)的脊柱不穩(wěn)或加速相鄰椎間盤的退變，所以其遠(yuǎn)期療效并不理想。組織工程學(xué)的發(fā)展為解決這一難題提供了一種新的選擇，通過組織工程學(xué)的方法修復(fù)或復(fù)建退變椎間盤組織是目前

2、國(guó)內(nèi)外進(jìn)行的一項(xiàng)熱點(diǎn)研究工作。Nishimura等發(fā)現(xiàn)通過早期移植自體髓核細(xì)胞可減緩甚至有逆轉(zhuǎn)IDD發(fā)生的可能。髓核是乏細(xì)胞組織，而且髓核細(xì)胞體外培養(yǎng)表現(xiàn)出增殖緩慢，因此如何在體外培養(yǎng)時(shí)促進(jìn)髓核細(xì)胞增殖并維持其表型成為細(xì)胞移植治療研究IDD首先要解決的問題。 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells，bMSCs)是骨髓內(nèi)除造血干細(xì)胞(hematopoietic ste

3、m cells，HSCs)之外的另一類干細(xì)胞，是骨髓造血微環(huán)境的重要組成部分，由于它們來自骨髓的支持結(jié)構(gòu)，并作為滋養(yǎng)層支持造血干細(xì)胞的生長(zhǎng)，因此也被稱為骨基質(zhì)細(xì)胞(bone marrow stromalcells，bMSCs)。隨著組織工程學(xué)的發(fā)展，bMSCs作為一種具有多種分化潛能的種子細(xì)胞越來越受到人們的關(guān)注和研究。但實(shí)際上，人們認(rèn)識(shí)bMSCs的功能是從對(duì)造血組織的支持和調(diào)控造血的作用開始的，近年來研究發(fā)現(xiàn)該類細(xì)胞在體內(nèi)、外對(duì)共培養(yǎng)

4、的其它組織和細(xì)胞也有支持和輔助作用。 纖維環(huán)及移行區(qū)的組織均來源于間充質(zhì)，采用比纖維環(huán)分化更早期的間充質(zhì)干細(xì)胞與髓核細(xì)胞共培養(yǎng)理論上也存在上調(diào)髓核細(xì)胞活性的可能，本研究擬通過建立共培養(yǎng)模型探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)髓核細(xì)胞活性的影響。 目的：建立髓核細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)的模型，研究體外共培養(yǎng)條件下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)髓核細(xì)胞活性的影響，以探討一種在體外培養(yǎng)條件下安全、簡(jiǎn)便的提高髓核細(xì)胞的活性方法。 方法：將術(shù)中

5、取獲取的成人骨髓標(biāo)本分離出bMSCs經(jīng)過傳代、純化、取P<,3>代bMSCs按每孔1×10<'4>接種于transwell插入式共培養(yǎng)皿(6孔板)底層，共12孔；再將術(shù)中獲取的成人髓核標(biāo)本分離出髓核細(xì)胞，按每孔1×10<'4>接種于共培養(yǎng)皿上層，重復(fù)12孔作為實(shí)驗(yàn)組；另按1×10<'4>接種髓核細(xì)胞于普通6孔培養(yǎng)板，重復(fù)12孔作為對(duì)照組。培養(yǎng)過程中觀察共培養(yǎng)條件下髓核細(xì)胞形態(tài)變化，待共培養(yǎng)皿中髓核細(xì)胞融合后，分別計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中髓核

6、細(xì)胞，同時(shí)用酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法(enzyme-linked immunosobnent assay，ELISA)方法檢測(cè)培養(yǎng)上清液中蛋白多糖含量變化，并進(jìn)行比較。 結(jié)果：經(jīng)過共培養(yǎng)后8天實(shí)驗(yàn)組中的髓核細(xì)胞達(dá)到90％融合，而對(duì)照組中的髓核細(xì)胞只在局部有少量融合，大部分細(xì)胞仍然呈散在分布。細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示實(shí)驗(yàn)組髓核細(xì)胞的增殖速度及ELISA法測(cè)定的實(shí)驗(yàn)組蛋白多糖合成均較對(duì)照組明顯提高(P<0.01)。 結(jié)論：成功建立骨髓間充質(zhì)